丁香园论坛关于显微镜问题汇总（三）
chujun_hust：我现在已经筛选出高表达EGFP的细胞，我想测量细胞数量与GFP荧光强度的相互关系，我设计了一个方案：把不同个数的细胞接种到96孔板中（比如1X102～1X105个/ml），然后只利用倒置荧光显微镜测量出每孔的总荧光强度，不知道能不能测出来啊？？？？？不知道怎么测啊？或者有没有其它好方法啊？
schoman：还是用流式来测吧，比荧光显微镜方便，结果好。流式现在到处都是，而且又不需要特殊处理，只要消化处理成为单个核细胞就可以上机检测了。可以准确的检测出细胞的相对荧光强度。
lalal308：我现正在进行钙火花的测定，由于设备原因而不能测定具体困难如下：
1、有关MRC-1024激光共聚焦显微镜进行钙瞬时测定（即测定钙火花）的具体方法、设备的使用参数。
2、哪有先进的激光共聚焦显微镜，能进行钙火花的测定，并可以接受外来人员。
murong：据我所知，国内很多单位是买了激光共聚焦显微镜，而且一般都有对外服务业务，您最好说明一下自己是哪里的，那样方便战友为您提供有用的信息。
tgsslan：我要给某链霉菌用血球计数板计数，请问一定要用油镜观察吗？没有油镜的情况下，用普通的物镜可以吗？
mutongfeige：对于真菌来说，用40倍物镜进行计数应该够了，但要注意将光线调暗一点，才好观察。
yanghao：我觉得还是用油镜好，因为用高倍镜的话，不能清楚的分辩链霉菌，计数的话不准确且不能与其他的G-菌区别，如果要求不高的话当然也可以用40倍镜。如果是霉菌还可以用美兰简单染色，我是学检验的，我试过很多。
roc7464112：不要用油镜，用40倍就可以，但是要调好：灯光的亮度，彩虹光圈的大小，聚光镜的位置，一般把新把彩虹光圈调到最大，再调整灯光的亮度和聚光镜的位置，直至不太亮，再对焦，然后左手调光源大小，右手调聚光镜的位置，直至刻度线和菌都能看清楚。有必要的话还有再调一下聚焦微调。
yxssdoctor：一定不能用油镜，理由如下：当用镜检对微生物计数时，菌体较大的酵母菌或霉菌泡子应该采用血球计数板；一般细菌则采用彼得罗夫-霍泽细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，应该使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜。
celia_xl：最近我们系买了一台CONFOCAL，我想现在有很多单位都已经使用了，所以我想这些同志能否谈谈CONFOCAL的用途，使用心得，让大家也学习学习。
zxmshwo：根据我的印象，Confocal（激光共聚焦显微镜），又称为细胞CT，主要是对细胞内部结构进行定量、定性观察，和细胞内一些离子定量检测。主要适用细胞培养。
NewCureSeeker：共焦点荧光显微镜与普通荧光显微镜相比，有以下优点：
1、Z轴上的分解能高。
（1）可观察被染上荧光的物质在细胞里的分布：例如，是在细胞膜上还是在细胞核里。
（2）即使组织标本较厚，也可获得鲜明的画像。
（3）可了解组织的3D结构。
2、高画质
（1）通过调节pin-hole，不但可提高Z轴上的分解能，也可提高X-Y轴上的分解能。
（2）可以在光学和电子两个水平调节对比度，因此可以从低对比度组织标本，拍摄到高对比度的图像。
