细菌转化
实验概要
本实验介绍了细菌转化的两种方法：电击法和热击法。
主要试剂
LB培养基
主要设备
电击杯，电击仪，1.5 mL的离心管，摇床，恒温水浴锅
实验材料
DNA样品或者连接产物，细菌感受态细胞
实验步骤
1. 电击转化
1) 加DNA样品或者连接产物于融化的细菌感受态细胞中，混匀后加入冰预冷的电击杯中。
2) 将电击杯放入电击仪中，以2.2KV电压电击。
3) 立即加入适量的液体培养基，混匀后并转移至1.5 mL的离心管中，37℃ 培养1小时(大肠杆菌)或者28℃ 培养2-3小时(农杆菌和假单胞杆菌)。
4) 取适量菌液涂在相应的选择平板上，37℃ 培养过夜(大肠杆菌)或28℃ 培养2天(农杆菌和假单胞杆菌)。
5) 筛选阳性转化子。
2. 热激转化
1) 在冰上融化后的感受态细胞中加入连接产物，混匀后冰浴30分钟。
2) 42℃ 恒温水浴热激90秒，然后置冰上3-5分钟。
3) 加入适量的LB培养基，混匀后37℃ 振荡培养60分钟。
4) 取适量菌液涂在相应的选择平板上，37℃ 培养过夜。
5) 筛选阳性转化子。
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