原代细胞培养经典案例和细胞药筛介绍（二）
3、神经元细胞原代培养
步骤：
1）出生 2 d SD大鼠经戊巴比妥钠麻醉后，碘酒、75％乙醇消毒腹部皮肤，依次剪开皮肤、肌肉、皮下筋膜，无菌操作下取出胚胎放入预冷的D-Hanks平衡盐液中。
2）在解剖显微镜下分离并取出胚胎大脑皮层，除去脑膜，剪碎组织成约1mm3大小，加入胰酶-EDTA消化液并放入37℃孵箱内消化20min，中间摇晃一次。
3）用滴管吸出组织转移到装有预冷的培养液（DMEM＋10％FBS）的离心管内终止消化液作用5min。
4）用滴管吸出组织转移到装有预冷的DMEM＋10％FBS的离心管内，用火焰抛光的巴斯德滴管吹打数次，静置后取上清吸到另一支离心管内。重复上述步骤2～3次。
5）将所收集的上清经200目筛网过滤。
6）过滤后的细胞悬液于800r/min离心5min，弃上清，管内加入新鲜培养液（DMEM＋20％FBS）并吹打成单细胞悬液。
7）细胞计数，调整细胞密度按1.5×105/cm2种入6孔板内，放入CO2孵箱中培养。培养48h后换液并加入Ara-C使其终浓度为1×10-5mM/L。Ara-C作用24h后全量换液。以后每隔3天半量换液一次。
皮层神经元
4、小鼠血管平滑肌细胞（组织贴块法）
试验方法：组织贴块法
步骤：
1)颈椎脱臼处死小鼠，开胸、腹腔，暴露心脏剪取胸主动脉
2)用镊子轻轻剥离血管外结缔组织
3)用眼科剪沿纵轴剪开血管条，无菌镊轻轻刮除内膜
4)用镊子钝性加压刮中膜,待出现裂口后夹住中膜将其取出
5)将取下的中膜加入含 20%FBS 的 DMEM 培养液，用眼科剪剪碎成血管条；
6)用无菌滴管将组织块吸入细胞培养瓶，均匀铺于瓶壁，间距约 0.2～0.5cm；
7)将培养瓶直立放置于培养箱；1h 后轻轻放平
8) 每 3d 换液 1 次； 3～8代用于后续实验
血管平滑肌细胞
5、中心可提供的原代培养种类
中心可提供原代培养种类（部分） | |
呼吸系统 | 肺微血管上皮细胞 肺成纤维细胞 气管上皮细胞 |
循环系统 | 心肌细胞 心肌成纤维细胞 主动脉平滑肌细胞 主动脉内皮细胞 |
消化系统 | 肠平滑肌细胞 食管上皮细胞 胃上皮细胞 |
泌尿系统 | 肾系膜细胞 肾小管上皮细胞 膀胱逼尿肌细胞 |
脑、神经系统 | 大脑皮质神经元 大脑海马神经元 胶质细胞 微血管内皮细胞 |
骨、关节、肌肉系统 | 骨髓间充质干细胞 成骨细胞 破骨细胞 软骨细胞 |
生殖系统 | 子宫内膜上皮细胞
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眼耳鼻喉口腔系统 | 牙源性间充质细胞 视网膜微血管内皮细胞 |
血液、淋巴系统 | 外周血淋巴细胞 DC细胞 NK细胞等 |
