酵母细胞破碎实验——液氮破碎法
实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 酵母在YPD(或选择性)培养基中剧烈振荡下培养至对数中期。离心,弃上清,市售酵母糕可以用来代替培养细胞。
4. 往1 L Nalgene 烧杯中加入400 ml 液氮,将注射器悬于液氮之上,除去底部的塞子或Parafilm 膜,插入活塞,将细胞糊推入液氮中。粘稠的细胞糊会形成长而细的条状物,稀的细胞糊会形成爆米花样的团状物,使用1 L 的混合杯一次最多可处理约200 ml 细胞糊,破菌之前冰冻细胞可于-80℃无限期贮存。
6. 盖上混合杯的盖子,确定盖孔是打开的,这样液氮蒸发时不会造成压力,将盖子盖紧,髙速连续搅拌3次,每次2 min。在搅拌间隙可混匀冰冻粉,必要时加入液氮刚好覆盖住冰冻粉,倒入液氮之后要尽快开始搅拌以避免冻住可动部分。 |
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