关注公众号

关注公众号

手机扫码查看

手机查看

喜欢作者

打赏方式

微信支付微信支付
支付宝支付支付宝支付
×

细胞有丝分裂的试验操作流程

2020.6.30

  (一)原材料

  1.待检材料(药品)。

  2.体细胞培养成层的贴壁细胞。

  3.实验试剂 甲醇、3%吉姆萨染液。

  4.器械CO2培养箱、倒置显微镜、盖玻片(2.2 cm×2.2 cm,需事先清理和杀菌解决)、塑胶培养皿(3.5 cm)、载玻片、封片用盖玻片、中性化虫胶。

  (二)实验方法

  1.将体细胞消化吸收成单独体细胞悬浮液,将体细胞悬浮液分瓶培养,分紅不用药的对照实验和加微信好友不同使用量药品的试验组。

  2.体细胞传代培养的方法培养体细胞,并做成浓度值为105/ml的体细胞悬浮液。

  3.将清理和杀菌解决的盖玻片置放在塑胶培养皿中,将体细胞悬浮液摇匀后打疫苗于培养皿中,各皿中打疫苗量相同。

  4.分离于培养24 h、48ht和72h后从培养皿中取下盖玻片,在Hanks液中浸洗2~3次。

  5.先加甲醇固定不动30 min,再用吉姆萨染液染色剂。晾干完用中性化虫胶封片。

  6.油镜下或低倍镜下记数1000个体细胞中处在扭曲期的体细胞数。

  7.结转MI按以下关系式结转MI。

  (三)成效与剖析

  将对照实验和药品组的实验成效绘制成直方图并多方面较为,也可绘制成MI曲线图开展较为:

  (四)常见问题

  1.以便减少偏差,试验者必须掌握各期扭曲象体细胞的样子特点,该实验从头至尾最好是由1人完成,当两个人左右调研时,应掌握相同的规范。

  2.MI曲线图与体细胞生长曲线发展趋势本质类似,但不完全相同。假如在体细胞提高达饱和状态密壁并进到中断过后.体细胞总数很多,而扭曲象体细胞可完全消退。

  3.体细胞在盖玻片上的相对密度常不匀称,体细胞密集的地方与稀少区域扭曲象体细胞数量或许不同。记数时要选择相对密度类似区,以减少试验误差。

  文章链接:仪器设备网 https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-1227.html


推荐
关闭