细胞培养（cell culture）的一些常见问题与解答-2
6、血清的有关问题：
新生牛血清：新出生牛5天内取血制成
小牛血清：小牛出生16周以内采血制成。
胎牛血清：（进口血清）要求剖腹取胎制成。
国内厂家往往不能做到，经常把出生2天以内采血称为胎牛血清。
根据血清的生产工艺及血红蛋白、内毒素含量又分为：
（1）特级胎牛血清：40纳米过滤，内毒素含量≤10EU，
血红蛋白含量≤10mg/dl。
（2）优等胎牛血清：经过3次100纳米过滤，
内毒素含量≤25EU/ml，
血红蛋白含量≤25mg/ml。
（3）标准胎牛血清：3次100纳米过滤，低内毒素，低血红蛋白含量。
（4）活性碳/葡聚糖处理血清：激素含量大大降低。
（5）透析型胎牛血清：次黄嘌呤和胸腺核苷含量大大降低。
7、培养基在使用过程中应注意的问题：
（1）培养基在使用前需37℃预热或在室温平衡后再使用。
（2）细胞培养过程中，吸取过培养液的吸管不能再用火焰烧灼，防止残留在吸管内的培养基焦化，将有害物质带入培养液中。
（3）尽量缩短各种液体、细胞的暴露时间。
（4）避免液体间、细胞间的交叉污染。
（5）配制完全培养基时，配制的量最好在2周内用完为好。
8、其他细胞培养用液：除培养基、血清、谷氨酰胺外，其他几种液体也属必须，不可省略。
（1）双抗：200倍，（1ml/支）其终浓度为青霉素100U/ml；链霉素100ug/ml，-24℃保存。
（2）L-谷氨酰胺：100倍，（1ml/支）， 终浓度2mM，-24℃保存。
（3）丙酮酸钠：配制浓度50mM，4ml/支，终浓度为1mM/ml，-24 ℃保存。
（4）Hepes液：配制浓度1M（5ml/支），一支Hepes加入到200ml完全培养基中，终浓度为25mM/ml，常温保存。
9、支原体污染及检测：
（1）支原体污染在细胞培养中最常见、不易被查觉，但支原体污染可显著影响细胞功能干扰实验结果。支原体是介于细菌和病毒之间的目前所知能独立生活的最小微生物，它无细胞壁，形态呈高度多形性，最小直径0.2um，可通过滤器。
目前中心通过对国内100余株/系细胞的检测，形势不容乐观。污染率达30%～60%
。课题组从国外引进细胞株/系也经常出现支原体的污染。支原体在污染细胞后，它通过影响细胞的DNA、RNA
的合成及急速消耗培养基中的氨基酸来抑制细胞的生长，并能降低细胞的融合率。因此，在运用各种细胞系进行实验研究时，首先要证明所用细胞有无支原体的污染。
（2）支原体污染后，培养基可不发生浑浊，细胞病变轻微或不明显，因此难以发现。目前，支原体检测的方法有以下几种。
（a）相差显微镜观察；
（b）.低张处理地衣红染色法；
（c）荧光染色法；
（d）.酶标法；
（e）PCR法：基础医学细胞中心使用该方法进行检测。
优点：灵敏度高，检测耗时短，样品量小（只需50ul细胞培养用液上清）。
缺点：引物及制剂费用较高。
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综述
