质粒DNA大量制备实验
碱裂解法
平衡离心法
| 实验方法原理 | 这一方案科能是最常用的质粒制备方法，该法不仅相当决捷可靠，而且可获得相当纯净的粗制DNA。 |
|---|---|
| 实验材料 | 大肠杆菌 |
| 试剂、试剂盒 | 葡萄糖 Tris EDTA TE NaOH SDS 异丙醇 乙醇 乙酸甲 |
| 仪器、耗材 | 离心机 漩涡混合器 水浴锅 |
| 实验步骤 |
1. 往2 ml 烧瓶中加入500 ml ，含有适当抗生素的LB培养基，然后加入5 ml 过夜培养的。 3. 于4℃，6 000 g 离心10 min，用4 ml GTE。
5. 加入1 ml 新配的含25 mg/ml 溶菌酶的GTE溶液，重悬沉淀，于室温放置10 min。
6. 加入10 ml 新配的NaOH/SDS溶液，并且轻轻混匀直至液体变得均一、清亮而粘稠。于冰上放置10 min。
7. 加入7.5 ml 乙酸钾溶液，用吸管轻轻搅拌直至粘稠度下降并形成大的沉淀，于冰上放置 10 min。
8. 于4℃，20 000 g 离心10 min 将上清轻轻倒入至另一个干净的离心管中，如果有可见的飘浮物可用数层纱布过滤。
11. 加入2 ml 70%乙酵轻轻洗涤沉淀，然后短暂快速离心，吸去乙醇，并真空干燥。
12. 沉淀可以在4℃无限期保存。
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