人抗凝血酶-ⅢELISA检测试剂盒技术原理
本试剂仅供研究使用 标本：血清
试验原理：
AT-III试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知AT-III浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将AT-III和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，人抗凝血酶-ⅢELISA检测试剂盒然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中AT-III的浓度呈比例关系。
洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。
试剂盒组成：
操作步骤
使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
在450nm波长处测定各孔的OD值。
局限
6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。
试剂盒性能
1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。人抗凝血酶-ⅢELISA检测试剂盒稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性：不与其它细胞因子反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。
结 果 判 断 与 分 析
1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的AT-III标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的AT-III含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
3、检测值范围：0-40IU/ml
4、敏感度： 0.1 IU/ml
来源：上海樊克生物科技有限公司
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