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核酸检测革命:rpa技术原理

2020.4.17

  重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA),被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。本专题为大家详细介绍RPA的原理、引物设计、疑难解答以及在致病菌检测、病毒检测以及癌症研究中的灵活应用。

  自PCR技术诞生以来已经有三十年了,从经典PCR、实时定量PCR再到现在的数字PCR,这一技术在不断蜕变却从未淡出我们的视野。很多人的实验根本离不开PCR。笔者曾经也接触PCR很长一段时间,加样、设置程序、等待、检测。这些过程看起来容易,但实验结果却总是会出人意料,很多时候根本不知道是哪里出了错。那么要是有一款技术,它比PCR更快速、便捷、高效,你会感兴趣吗?

  RPA是什么?

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  基本原理

  重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA),被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,zui适反应温度在37°C左右。

  重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应形成并启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合,防止进一步替换。在这个体系中,由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快,一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。

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