流式细胞术在血液学中的应用（一）
一、流式细胞术在基础血液学中的应用
（一）血细胞的计数和分类研究
1．红细胞的计数、分类及其功能的研究
（1）循环的红细胞总量的测定：
生物素—逆转抗生物素蛋白—FITC系统的特异性和流式细胞 仪（FCM）的敏感性结合起来，建立了FCM测定人红细胞总量的方法，此方法具有标本用量少，无放射性的优点，适用于儿童和孕妇测定循环红细胞总量。
（2）网织红细胞总数：
外周血网织红细胞计数（百分数和绝对值）是一反映骨髓红系增生活性的常用指标。许多学者先后提出应用FCM和不同的RNA特异性荧光染料自动计数网织红细胞的方法，如派若宁Y、AO、溴化乙啶、thiazole orange等。
目前最普遍应用的是 thiazoie orange 染色法，这种特异性RNA
的激发波（488nm）测量的特点，与人工计数法相比，它不但能得到网织红细胞的百分数和绝对值，而且还能获得网织红细胞成熟指数（RMI）。RMI是一个检测骨髓功能的独立实验室指标，它与网织红细胞内RNA含量成正比，RMI可成功地用于评价骨髓移植的效果。
目前，FCM检测网织红细胞主要用于
1）预测骨髓移植的效果；
2）解释各种红系增长低下性贫血的发病原因;
3）评价某些新的重组生物制剂的治疗效果。
2．白细胞计数、分类及其功能的研究
（1）白细胞计数和分类
FCM方法避免常规染色过程中，由于细胞漂洗和分类溶解所致的人工假象，提供了可靠的评价血液状态的第一手资料，并进一步筛选细胞亚群、测定其他参数。LDS-751、CD45、thiazole orange
（2）中性粒细胞的功能
FCM可在单个细胞水平上定量测定中性粒细胞的功能变化，有助于了解白细胞在感染性疾病、自身免疫性疾病、恶性疾病的作用和诊断意义。
（3）血小板功能的研究：
FCM可检测血小板膜抗原，如CD41a、CD42b、CD36、CD62p、CD63等。应用流式细胞术检测这些单克隆抗体的变化可用于：
a、评价血小板功能状态;
b、探测循环血液中激活的血小板;
c、探测血小板自身抗体。
如对原发性血小板减少性紫癜、慢粒急变和再障病人的血小板自身抗体的检测中发现，病人均可探测到IgM型自身抗体，有的病人可同时伴有IgM或IgA自身抗体，后者血小板减少更明显。因此，IgG血小板免疫荧光检查是检测自身免疫反应的敏感和特异指标，它可直接测定自身免疫性血小板减少病人的血小板表面免疫球蛋白，进行血小板交叉配型，以此为有自身免疫反应的病人选择合适的供血者。
（二）正常骨髓各系血细胞特点的研究
1．造血干细胞的特点：
FCM多参数分析可以探测常规形态检查方法不能确认的造血干细胞。
2．红细胞系统的特点：
FCM系统地观察了红系统表面特异性抗原（Hle-1、CD71和Glycophorin
A）核酸及红细胞体积的变化来研究红系在正常骨髓分化成熟的规律。Glycophorin
A常作为红细胞晚期的特征，出现在有核红细胞，此时可与体积相似的淋巴细胞进行鉴别，Glycophorin
A在成熟红细胞达到最大值，不再随红细胞的成熟而变化。CD71表达介于Hle-1和Glycophorin A之间，在Glycophorin
A出现之前，达到最大值。Hle-1主要表达在最早期可鉴别的红细胞上，随着红细胞的成熟而逐渐减少，红系随着成熟细胞体积逐渐减少的物理特点，可由FCM的前向散射光来测得。另外，在CD71和Glycophorin
A成熟红细胞中，DNA含量逐渐减少，以至只含有RNA，失去CD71成为成熟红细胞。
3.粒细胞的特点
（1）区别正常粒细胞和白血病克隆；
（2）确定白血病是以粒系为主，还是以单核细胞为主；
（3）探测粒细胞白血病的异质性。
4.巨核细胞的特点
应用FCM同时观察巨核细胞的体积，内部结构，DNA含量以及膜表面抗原在细胞分化成熟中的变化。
5.正常骨髓B细胞的分化和成熟
Ⅰ期：CD19、CD34、HLA-DR、TdT、CD10、Ig基因重排
Ⅱ期：失掉CD34、核TdT，CD10减弱，HLA-DR强度增加4倍，
同时表达HLA-DP和CD45 、CD19
Ⅲ期：CD20、HLA-DQ、SigM、CD19
Ⅳ期：CD19、CD21、CD22，不表达CD10
6.正常骨髓浆细胞的特点
两群：一群体积较小，表达CD22、CD35和SigE，是早期浆细胞。
另一群体积较大，膜抗原表达有明显异质性。
7.正常骨髓细胞DNA含量与细胞表型
S期：红系>粒系>单核系>淋巴系
淋巴系统中，S期的T细胞百分率明显低于B细胞
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综述
