蛋白质的生物合成标记实验
甲硫氨酸短时间标记悬液中的细胞
甲硫氨酸短时间标记贴壁培养细胞
甲硫氨酸对细胞进行脉冲追踪标记
实验材料 | 蛋白质 |
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试剂、试剂盒 | 甲硫氨酸 PBS |
仪器、耗材 | 培养箱 离心管 |
实验步骤 |
1. 培养悬浮细胞至对数增长期,室温300 g 离心5 min。回收107~108细胞。
2. 每2×107细胞用约10 ml 37℃的短时间标记培养基在圆锥型试管中洗涤,于室温300 g 离心5 min 回收细胞,小心重悬细胞并重复洗涤过程。
5. 室温300 g 离心5 min,回收细胞,每2×107细胞以4 ml[35S]工作液重悬于圆锥试管。37℃水浴保温30 min~3 h,频繁翻覆试管以混悬细胞。
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注意事项 |
1. 在标记过程,会释放挥发性的[35S]化合物,在使用前须把过于37℃水浴的[35S]甲硫氨酸紧紧密封,不要在37℃放置超过30 min。
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