WesternBlot实验背景高原因分析及解决办法
膜没有完全均匀湿透,建议 使用100% methanol浸透膜；
洗膜不充分，可以增加洗液体积和洗涤次数；
电极不平衡或者加样位置偏斜，可以调整电极和加样；
封闭物用量不足，可以提高封闭物浓度，孵育时保证封闭液完全浸没转印膜；
封闭物使用不当，比如检测生物素标记的蛋白时不可用脱脂奶粉封闭；
封闭时间不够，一般情况下室温37度封闭1小时以上或者4度封闭过夜；
1）抗体非特异性结合，可以降低抗体浓度，减少孵育时间。
2）一抗稀释度不适宜，可以对抗体进行滴度测试，选择最适宜的抗体稀释度。
3）一抗孵育的温度偏高，建议4℃结合过夜。
4）抗体浓度过高或洗涤不够，建议降低抗体浓度，增加洗涤次数和时间。
5）化学显色底物过多，建议按说明书加入适量的显色底物。
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