出口食品中霍乱弧菌检验方法！

2020.7.20

　　出口食品中霍乱弧菌检验方法！

　　一、培养基明细：

　　名称规格价格（元）

　　碱性蛋白胨水（APW） 250g 70

　　TCBS琼脂 250g 95

　　三糖铁琼脂（TSI） 250g 85

　　双糖铁琼脂（KIA） 250g 85

　　T1N1琼脂 250g 85

　　精氨酸葡萄糖斜面琼脂（AGS） 100g 385

　　Hugh-Leifson葡萄糖肉汤（HLGB） * *

　　MR-VP肉汤 20支 15

　　ONPG胨水 20支 35

　　Andrade氏糖类肉汤 250g 80

　　Andrade氏指示剂 100ml 50

　　氧化酶试剂 1g 50

　　粘丝试验溶液 * *

　　革兰氏染色液 5ml*8 40

　　5%红细胞生理盐水 * *

　　50万单位多黏菌素B纸片 * *

　　10ug和150ugO/129纸片 * *

　　霍乱弧菌诊断血清（O1群） 1ml*12 480

　　霍乱弧菌诊断血清（O139群） 1ml 50

　　二、备注：

　　1、依据SN/T 1022—2001出口食品中霍乱弧菌检验方法适用于出口水产品及其它食品的检验。

　　2、术语：

　　霍乱弧菌：为革兰氏阴性菌，菌体弯曲呈弧状或逗点状，菌体一端有单根鞭毛和菌毛，无荚膜与芽胞。经人工培养后，易失去弧形而呈杆状。细菌运动极为活泼，呈流星穿梭运动。营养要求不高，在PH8.8～9.0的碱性蛋白胨水或平板中生长良好。因其他细菌在这一PH不易生长，故碱性蛋白胨水可作为选择性增殖霍乱弧菌的培养基。在碱性平板上菌落直径为2mm,圆形，光滑，透明。

　　霍乱弧菌能还原硝酸盐为亚硝酸盐，靛基质反应阳性，当培养在含硝酸盐及色氨酸的培养基中，产生靛基质与亚硝酸盐，在浓硫酸存在时，生成红色，称为霍乱红反应，但其他非致病性弧菌亦有此反应，故不能凭此鉴定霍乱弧菌。EL Tor型霍乱弧菌与古典型霍乱弧菌生化反应有所不同。前者Vp阳性而后者为阴性。前者能产生强烈的溶血素，溶解羊红细胞，在血平板上生长的菌落周围出现明显的透明溶血环，古典型霍乱弧菌则不溶解羊红细胞。个别EL Tor型霍乱弧菌株亦不溶血。根据弧菌O抗原不同，分成Ⅵ个血清群，第Ⅰ群包括霍乱弧菌的两个生物型。第Ⅰ群A、B、C三种抗原成份可将霍乱弧菌分为三个血清型：含AC者为原型（又称稻叶型），含AB者为异型（又称小川型），A、B、C均有者称中间型（彦岛型）。霍乱弧菌对热，干燥，日光，化学消毒剂和酸均很敏感，耐低温，耐碱。湿热55℃，15分钟，100℃，1～2分钟，水中加0.5ppm氯15分钟可被杀死。0.1%高锰酸钾浸泡蔬菜、水果可达到消毒目的。在正常胃酸中仅生存4分钟。

　　3、粘丝试验溶液：溶解0.5g去氧胆酸钠于100ml水中，拧紧瓶盖保存于冰箱中，无需高压灭菌。霍乱弧菌在钙溶液中被乳化后，1min内形成粘液状团块。当粘块从玻片上被拉出2cm—3cm时呈粘丝。

　　4、Hugh-Leifson葡萄糖肉汤（HLGB）：

　　配方：

　　蛋白胨 2.0g

　　酵母浸粉 0.5g

　　氯化钠 30.0g

　　葡萄糖 10.0g

　　溴甲酚紫 0.015g

　　琼脂 3.0g

　　蒸馏水 1000ml

　　制法：将各成分（溴甲酚紫除外）加入蒸馏水中，充分混匀，搅拌加热溶解调节pH7.4，加入溴甲酚紫，混匀，分装于15mm*150mm试管的1/3容量，121℃高压灭菌15min。接种后覆盖约1ml灭菌矿物油以检查葡萄糖发酵。

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