红细胞的志敏方法及影响因素
1．致敏抗原剂量的确定一般而言，在一定的范围内，抗原的浓度与试验的敏感性呈正比，超过这个范围，再增加抗原，敏感性不会再提高，而且过大，有时会引起非特异性凝集。当采用一种新的抗原时，必须经过试验，选择适当的抗原致敏浓度，即把抗原稀释成几个不同的浓度分别致敏红血球。再用这些致敏红血球分别与标准阳性血清进行试验，与标准阳性血清呈最高滴度的阳性反应的最小抗原剂量，即为该抗原的单位计量。致敏时，根据不同的抗原，可采用2～4个单位计量进行致敏。
2．致敏方法各种抗原的致敏方法大致相同，一般蛋白质的致敏方法如下：
所需浓度的抗原1份
pH6.4PBS液4份
2.50%的鞣化红血球悬液1份
混匀，置37℃水浴30min，离心，沉淀后，以2.5%兔血清生理盐水洗涤1次，悬浮于1份兔血清生理盐水中。
3．影响红血球致敏的因素
⑴要有高纯度或高效价的抗原或抗体。
⑵被致敏抗原或抗体的适当剂量和浓度。如抗体一般以μg/ml IgG为宜。抗猪瘟IgG一般用80μg/ml～160μg/ml，抗口蹄疫IgG 20μg/ml~40μg/ml，抗猪水泡病IgG 130μg/ml~160μg/ml，抗猪肺疫IgG 30μg/ml ~40μg/ml，抗猪弓形体20μg/ml~40μg/ml，抗原一般用0.2mg/ml～1mg/ml。
⑶pH：除鸡卵蛋白采用4.6～5.1外，其它通常采用5.6～6.4，高于7.2或低于4.6均可使红血球发生自凝。
⑷致敏温度：一般为37℃，范围是20℃～40℃。
⑸致敏时间：一般采用30min为最适时间，具有良好的特异性和重复性。也有采用60min。时间过长，会造成红血球的形态不整，反应结果紊乱等。
⑹血球浓度：一般为1%，范围为0.5%～1.5%。
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