肾小管细胞氧化性损伤模型
材料：DMEM培养基(Gibco BRL Co生产)， 无糖DMEM培养基(Gibco BRL Co生产)，NRKSIE 鼠。肾小管细胞株(购于华西医科大学内科实验室)，乳 酸钠(国产分析纯试剂)。
方法 肾小管细胞培养 NRKSIE鼠肾小管细胞 用0．25% 胰蛋白酶消化，将小管细胞分离成单个细胞悬液，用含100 mL/L 胎牛血清的DMEM培养基，于37℃5%(体积分数)CO2 孵箱中培养。每 24 h更换培养液一次，培养2～3 d，待细胞生长成片备用。
实验 将细胞转种于96孑L板，细胞密度 为lO ·mL ，孵育24 h。培养液中加入 H 20 2，浓度为5mmol/L ，作用 30 min。
讨论：
肾小管氧化性损伤在肾脏的缺血一再灌注损伤和中 毒性损伤中起着重要作用。为了从细胞水平阐明活 性氧自由基对。肾小管细胞的作用，本实验用5 mmol/L H2 0 2建立了肾小管氧化性损伤模型。H2 0 2虽 不是自由基，但它属活性氧类，有高反应性，可促进自 由基的生成，引发生物膜的脂质过氧化反应，导致细 胞的坏死和凋亡。一般情况下，生物体内H 20 2常 被酶系统所清除，如过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶。在过氧化氢复制的肾小管氧化性损伤的模型中， 细胞的损伤非常明显，表现为细胞存活率降低，细胞 膜完整性破坏，LDH释放增加，线粒体肿大，溶解明 显增多，数目减少，细胞的脂质过氧化产物MDA含 量增高。利用培养。肾小管细胞复制氧化性损伤模型 避免了全身神经体液、激素水平及局部不同类型细胞间的相互影响，为更深入地从细胞水平研究。肾脏疾患提供了良好的模型。但由于实验所用的肾小管细胞 株，在体外培养的过程，其膜表面结构、细胞器(如线粒体)、酶活性等与原代培养的人肾小管细胞可能存 在一些差异，且该模型不能从血流动力学的角度反 映。肾小管细胞的功能。因此，培养的肾小管细胞氧化 性损伤模型必须与在体模型结合起来，相互补充。
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