丙烯酰胺包埋法固定化酶实验
实验方法原理
丙烯酰胺的聚合已经应用于聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE），也应用于酶的包埋。长的聚合物链通过交联 N，N'-亚甲基二丙烯酰胺连接而成（图 1）。聚合反应是通过N，N，N'，N'-四甲基乙二胺（TEMED）和过硫酸铵引发的。通过改变交联剂的数量，可以控制聚合物网孔尺寸，以此确定酶被固定而底物和产物能从催化位点自由地扩散。
实验材料 酶溶液
试剂、试剂盒 丙烯酰胺NN'-甲基丙烯酰胺NNN'N'-四甲基乙二胺过硫酸铵Tris-HCl磷酸钾
仪器、耗材 高速搅拌器
实验步骤
实验所需「试剂」具体见「其他」
在 8 ml 的酶溶液中，加入 1.5 g 的丙烯酰胺、80 mg 亚甲基二丙烯酰胺、10 ul 四甲基乙二胺和 30 ul 10％ 过硫酸铵。反应的混合物被控制在 37℃，还必须避免温度的升髙。聚合在 20 min 内发生。然后，用抹刀把凝胶切割成小片，再添加 10 ml pH 7.5 0.1 mol/L 磷酸钾缓冲液，凝胶粒子被高速搅拌器进一步地磨碎。凝胶微粒在玻璃料上被冲洗三次，之后直接用于酶的测试。
注意事项
其他
试剂：
丙烯酰胺（Mr＝71.1）
N，N'-甲基丙烯酰胺（Mr＝154.2）
N，N，N'，N'-四甲基乙二胺（TEMED，Mr＝116.2）
过硫酸铵（过硫酸铵 Mr＝228.2，10％ 水溶液，新鲜配制）
0.1 mol/L Tris-HCl pH 7.2
0.1 mol/L 磷酸钾，pH 7.5
0.1 mol/L 酶溶液（8 mg 溶于 8 ml 0.1 mol/L Tris-HCl pH 7.2）
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