中性粒细胞趋化试验检测IL-8活性
实验概要
在生物、化学或物理因素作用下，人体白细胞会产生一系列的具有生物活性（功能）的物质，其中的一个系列称之为白细胞介素。白细胞介素已发现有许多种，白细胞介素8（IL－8）是其中之一，而且近来又发现除了白细胞外，其他一些细胞也有产生白细胞介素的能力。人体在防御和清除入侵病原体等异物时，有一种使白细胞趋集的功能，有一些物质能引起这种功能称之为趋化剂或趋化因子，IL－8同时也是一种趋化因子。本实验用中性粒细胞的迁移距离来反映IL-8活性。
实验步骤
1. 配制2倍浓度的DMEM培养液100mL，其中含20mL的FCS，75mgNaHCO3，置48℃水浴预温。
2. 配制2％琼脂糖，水浴中保温48℃左右时，与上述2XDMEM等量混匀。
3. 制片(3mlJ片)，室温凝固后，放4℃ 30～60min进一步凝固，打孔。
4. 分离人外周血中性粒细胞，用DMEM调整细胞浓度为2．5×105／mL，取l0uL细胞悬液加人各组中心孔，上孔分别加10uL含趋化因子的待检样品及IL-8或其他阳性对照趋化因子，下孔加l0uLDMEM作阴性对照。
5. 将玻片放湿盒中，37℃温育2h后，甲醇固定30min，瑞氏染液染片并干燥。
6. 显微镜下分别测量细胞从中心孔边缘朝向样品孔游走的距离(趋化游走距离)及朝向阴性对照孔的游走距离(自发游走距离)，趋化活性以趋化指数表示。
为证实样品中趋化效应是IL-8特异的，还需将抗IL-8中和抗体先与待测样品混合，孵育1h后，加入玻片孔中，观察趋化反应。亦可用其他相关抗体阻断试验区别IL-8及其他趋化因子的作用。
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