细菌中制备基因组DNA实验
小量制备
氯化铯法
| 实验方法原理 | 提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。 |
|---|---|
| 实验材料 | 细菌 |
| 试剂、试剂盒 | TE 氯化铯 溴化乙锭 NaCl 乙醇 CTAB |
| 仪器、耗材 | 离心机 摇床 |
| 实验步骤 |
1. 培养5 ml 的细菌培养物至饱和状态，取1.5 ml 的培养物离心2 min。
4. 加入100 ul 5 mol/l NaCl充分混匀，再加入80 ul CTAB/NaCl溶液，混匀，于65℃温育10 min。
5. 加入等体积的氯仿/异戊醇，混匀，离心4~5 min将上清液转人一个新管中，如果难以移出上清，先用牙签除去界面物质。
6. 加入等体积的酚/氯仿/异戊醇，混匀，离心5 min，将上清液转入一只新管中。
7. 加入0.6体积异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来，用一个封口的巴斯德管将沉淀转移至1 ml 的70%乙醇中洗涤。
8. 离心5 min，弃上清，用冻干机稍加干燥，重溶于的下100 ul TE缓冲液，每次酶切反应用10~15 μl。
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