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膜电阻测量的FAQs

2020.6.02

EVOM2是WPI全球ZL产品,是最新一代用于特异性完成组织培养研究中TEER测量的电阻仪。它不仅可以定性地测量单层贴壁细胞的健康状态,而且也能定量地测量单层细胞的融合情况,可用于上皮细胞、胃肠道和呼吸道黏膜细胞、血管上皮细胞及血脑屏障等培养过程中细胞生长状态的评价以及药效动力学评价。

独特的EVOM2电路设计和STX2电极的完美结合,让其可以监测单层细胞的融合状态,当与WPI公司设计的EndOhm小室结合使用时,它也可以用来完成更加精确的定量测量或更低电阻的测量,如血脑屏障(BBB)内皮生长电阻测量。

下面,我们就大家常见的几个问题进行详细的解答。

 

1、EVOM2的工作原理是什么?

EVOM2 的工作原理是通过主机产生一个10 μA的恒定跨膜电流,同时以一定的频率反转电极的极性,这样电极和膜都没有电荷累积,通过STX2 的两个电流电极(I1和I2)使10 μA 的电流跨过细胞膜,另一对电极(V1和V2)测量要求达到10 μA电流所需要的电压,并将信息发送给处理器。处理器根据欧姆定律将其转化为欧姆,在读数表上显示数字。因为电流是固定的10 μA,因此,很容易就转化出测量结果。如在膜电阻为1000 Ω时,10 μA电流通过的电压应该是10 mV;在200 Ω膜电阻时,10 μA的电流将产生2 mV的电压;不论何种情况,在膜或电极上所消耗的能量都非常小。

2、什么是EndOhm小室?它与STX2电极有什么不同?

Endohm作为EVOM2可选电极室,可用来测量低电阻培养细胞或者高精度测量。Endohm与EVOM2一起使用是目前市场上最精确、最经济的一组内皮细胞电阻仪。

小室和盖子每一个都包含一对同中心电极:在中心有一个电压敏感性的银/氯化银半电极,外加一个环状的电流电极,电极上部的高度可以调节以便适应不同厂家生产的培养杯。对称的圆形盘状电极放置于膜的上部和下部,使其比STX2有更加均一的电流密度跨过膜两侧,大大提高了测量的稳定性和可重复性。与STX2最大的不同是培养皿必须从培养板转运至Endohm进行测量,Endohm小室对渗漏组织测量提供了更加方便和经济的解决方案。

3、怎样进行电极的预处理?

测量电阻时:不需要进行任何预处理,可以直接从干储存环境中取出使用。

测量电压时:电极使用前则需要平衡。为了确保电压稳定性和较低的电极间电势差,关闭EVOM2电源(O),并且在电极连接到EVOM2时,将电极浸入到点解液中(0.1–0.15M KCl)。当STX2 电压电极连接到设备且关闭电源时,在内部会形成短路。当电压电极回路短路几小时后,电极间的不对称电势差就会减小,内部电极直流电势差只有几毫伏甚至更少,同时十分稳定。在干燥环境中,平衡电极需要24小时;在溶液中,平衡电极需要2小时。

4、怎么清理我的电极?

(1)清洁STX2电极表面

在使用中,电极表面可能被蛋白质或其他物质覆盖。这种堆积或污染,会导致系统效率的降低,引起10-20mV电压误差,或者读数不稳(电阻测量不受影响)。如果需要解决这个问题,可以按以下步骤重新氯化电极或者清洁电极表面。

重新氯化:将电极浸入未经稀释的家用漂白水3分钟,浸泡后用清水立即冲洗,尽管这将重新氯化电极表面,但是不能纠正误差。(注意事项:确保只有电极尖端置于漂白液中,不能将漂白液接触电极上部。)

电极表面抛光:用600级砂纸轻轻打磨STX2的电压电极顶端内侧的银质小球(图9),轻轻除去银质小球的表层即可。(注意事项:多次重复打磨最终会除去所有的 Ag/AgCl 小球,如果打磨不再改善电压读数时,则需要更换电极。若没有600级砂纸,可用橡皮擦代替。)

(2)对STX2电极消毒

STX2 电极是未经消毒的。可以用酒精、环氧乙烷、紫外线或者杀菌剂消毒,不可以用用高压灭菌器消毒。(注意事项:电极每次在酒精中的浸泡时间不能超过30分钟。在酒精里长时间的浸泡,会破坏电极表面的保护层,从而缩短电极使用寿命。)

(3)电极存储

短期存储(两周以内):浸泡电极尖端在电解液中。确保电极线缆插头连接到EVOM2设备,以便保证系统内部短路并且保证电极对称性。

长期存储(两周以上):长期存储时,电极要用蒸馏水清洗并且放置在干燥、黑暗处。

(注意事项:当电极暴露在强光或者紫外线中时,电极表面会形成一层黑色氧化膜,通常,氧化膜不会影响电极性能,为了避免氧化膜的行成,应该避光储存。)

5、EVOM2目前可用于哪些研究领域?

1. 用于研究血脑屏障内皮细胞的药物和营养物质转运;

2. 用于CaCo-2大肠癌细胞或其它粘膜或上皮癌细胞的药效学研究。

3. 用于培养的肠道粘膜细胞的药物吸收和营养物质转运研究;


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