氟喹诺酮检测试剂盒说明书
注意：在使用前请认真阅读说明书（请以英文为准，中文仅供参考）
适用
Abraxis氟喹诺酮检测试剂盒适用于检测食物产品中氟喹诺酮的含量。
原理
Abraxis 氟喹诺酮检测试剂盒的原理是竞争酶联免疫反应。利用提取液通过震荡萃取从样品中提取氟喹诺
酮。然后经稀释、过滤、待测。在固相载体微孔板中加入氟喹诺酮-HRP 酶结合物，然后加入标准和处理的
样品，然后再加入氟喹诺酮抗体引发反应。孵育10 分，样品中的氟喹诺酮和酶标氟喹诺酮竞争于氟喹诺
酮抗体反应，氟喹诺酮抗体和微孔结合。洗板除去没有反应的试剂。加入底物显色剂、无色的显色剂转化
为蓝色的产物；孵育30 分钟后加入反应终止液终止反应，颜色由蓝色变为黄色；在450nm波长进行检测，
样品中的氟喹诺酮浓度与吸收光强度成反比。
特异性
Abraxis氟喹诺酮检测试剂盒不能区分不同种类的氟喹诺酮，检测不同的氟喹诺酮交叉率也不同。以下是试
剂盒对不同的氟喹诺酮的交叉反应列表。
检测限
肉、鱼虾: 1 ppb
蜂蜜: 2 ppb
试剂盒组成
试剂盒保存在2-8摄氏度。在有效期内都可以使用
1、96孔酶标板：1块（12×8条）。
2、氟喹诺酮标准品贮备液（Standard）: 6瓶（1ml/瓶），浓度分别为0, 0.2, 0.8, 3.2 6.4 和16 μg/L (ppb)
3、氟喹诺酮HRP酶标记物：1瓶（6ml）
4、兔抗氟喹诺酮抗体：1瓶（6ml）
5、5X 浓缩洗液：1瓶（100ml）
6、底物显色液：1瓶（12ml）
7、终止液：1瓶（12ml 、1N HCl）。
8、使用说明书
注意事项
1．最好配套使用所提供的试剂，不要同其它公司的产品混用，不要将不同批次的产品混用。
2．样品稀释或含有杂质很可能对结果的准确性有影响。
3．不要使用过期的产品。
4．使用之前将所有试剂回升至室温20-28ºC.不要在室温放置超过24 小时。
5. 氟喹诺酮是抗生素，小心对待。
6. 停止液是1N 盐酸，避免接触皮肤。如果接触请用大量的水冲洗。
7. 洗液是5X浓缩的，在使用时要用无离子水稀释（如100ml洗液加400ml无离子水），用稀释后的溶
液洗板
试剂盒未提供的材料
1、蒸馏水或无离子水
2、量筒100ml
3、烧杯（样品提取和收集）
4、离心机
5、移液器50 μL
6、50 and 100 μL 8 道移液器
7、吸水纸
8、450nm 酶标仪
9、计时器
10. 搅拌器
11. SPE C18 Column 200mg/3mL
12. 乙腈
13. 乙腈
14. 洗瓶
15. 乙腈
16. HCl
17. 乙腈
18. 10 mM PBS, [0.31 g NaH2PO4-2H2O+ 2.87 g Na2HPO4-12H2O + 9 g NaCl,加无离子水定容到一升。
样品处理
肉样
1.匀浆化样品。
2.在50ml的离心管中加入5克匀浆化的样品，再加入10 ml乙腈
3.剧烈震荡5分钟
4.室温3000转离心5分钟
5.取2ml上清液到一个干净的玻璃试管中，用氮气吹干。
6.然后加入2ml己烷，剧烈震荡1分钟，再加入2 mL10 mM PBS混匀。
7．室温3000转离心5分钟。
8.移除上层液体。
9.把下层液体转移到一个新的管中，待测。
蜂蜜样品（1：2 稀释）
1.在一个15ml 的带螺旋盖的玻璃瓶中加入1g 蜂蜜。
2.加入5 ml 1 M HCl 剧烈震荡混匀。
3.室温3000转离心5分钟。
4.用6ml 甲醇和6ml水前处理C18 柱。
5.把第三步骤的清澈的样品萃取液过柱(flow rate: 15 drops/min)。
6.用3 ml 水和3 ml 5% 甲醇/水溶液洗柱。
7.用弱的氮气流吹2 min清除残留的水样。
8.用5%的乙酸/甲醇溶液洗脱(flow rate: 15 drops/min)
9.用氮气吹干洗脱液。
10.用2 ml 10 mM PBS 溶解干燥的萃取物，剧烈混匀。
11.待测，检测结果乘以稀释倍数2。
操作步骤
注意：标准和样品做平行可以增加精密度和准确度
1、使用前将试剂盒和样品处理物提前从冰箱中拿出来使其达到室温。
2、从铝箔袋中拿出要求数量的微孔条，放入干燥剂并重新封好袋子以免微孔条受潮。
3、在对应的微孔中加入50μL 1：10 稀释后的标准和样品，确保吸头要干净。
4、每个测试孔都加入50 μL酶结合物
5、每个测试孔都加入50 μL抗体溶液
6、孵育30分钟
7、孵育完成后，将微孔中的溶液倒入水槽中，用1X 洗液加满微孔然后倒掉，重复三次，总共四次洗板。
8、在最后一次洗板后拍板，去掉残留的洗液。
9、每个测试孔加入100μL底物。
10、孵育30分钟
10、每个测试孔加入100μL终止液。
11、450nm 下读取每个孔的吸光度值（OD）。
结果分析
1．半定量结果的判定，可根据样品的吸光度值与标准的吸光度值来判定，样品的吸光度值低于某个标准
的吸光度值，则说明样品的氟喹诺酮含量大于此标准的浓度，样品的吸光度值高于某个标准的吸光度
值，则说明样品的氟喹诺酮含量小于此标准的浓度。
2．定量结果判定，需要以标准的吸光度值为X轴，标准浓度的对数为Y轴绘制曲线图，将标准浓度吸光
度值的点用直线连接，样品的吸光度值也位于这条直线上，根据样品的吸光度值在Y轴上即可找到相
应样品的浓度，如果样品的吸光度值大于最小标准的吸光度值或小于最大标准的吸光度值，即可说明
此样品中氟喹诺酮的含量小于0.2ppb 或大于16ppb。
