分光光度法测定解离常数的方法介绍
分光光度法是另一种常用的测定物质解离常数的方法。它是基于物质的分子状态和离子状态对某一波长光的吸收度不同的原理而建立起来的一种分析方法。当某种物质在溶液中达到解离平衡时，该溶液中同时存在物质的分子和离子状态，而这两种状态对同一波长的光的吸收度是不同的，因此，用分光光度计测得的溶液的吸光度是溶液中分子和离子吸光度的综合表现。若被测物是一元弱酸性物质，则其解离式为：
将上式中的
和Ka分别用它们的副对数pH和pKa表示且将物质浓度用其吸光度表示得：
式中 为100%离子型的吸光度、 为100%分子型的吸光度、
为测得的物质溶液的吸光度。在设法得到、和测得溶液的吸光度后就能得出物质的解离常数。
分光光度法对于测定在紫外--可见光区有较强吸收的物质的解离常数有很好的应用，同时也可以用来测定在紫外及可见光区吸收很弱（或无吸收）的物质的解离常数，但是此时需要在原来的基础上加入指示剂。方海红等 以硝基酚为指示剂采用分光光度法测定了延胡索乙素的解离常数，介绍了选择分析波长和测定纯物质分子和离子的吸光度的方法。
分光光度法适用范围非常广泛，操作简单，结果准确可靠，是一种很好的测定物质解离常数的方法。它不但适用于离解或非离解形式紫外一可见吸收光谱显著不同的化合物，还适用于低溶解度化合物及菲酸碱离解的情况。但是，分光光度法必须对每一种物质的酸性离解式、碱性离解式及弱酸弱碱式的吸光度逐一进行检测，对于大量生物碱性离解常数的测定，工作量很大。另外分光光度法在用于测定酸碱指示剂及显色剂类有机酸碱的pKa值时对工作波长的选择有严格的要求。
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