细胞培养大攻略7
62、贮存在冰箱中的瓶口已开的培养基，在放置几天后颜色变紫?
这主要是由于在暴露到周围的CO2水平时，碳酸氢纳导致了pH值的上升。您可以在使用前松开瓶口，在CO2培养箱孵育培养基10-15分钟，来校正溶液的pH值（确定松开瓶口以保证气体交换）。
63、 细胞培养基偶然被冻，可否继续使用？
如果细胞培养基偶然被冻，您应该熔化培养基并观察是否有沉淀产生。如果没有沉淀产生，培养基可以正常使用，如果出现沉淀，只能丢弃这些培养基。
64、无血清培养与有血清培养使用的抗生素量一样吗？
当在无血清培养基中添加抗生素时，降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。血清蛋白会结合和灭活一些抗生素。在无血清培养条件下，抗生素不被灭活，可能对于细胞达到毒性水平。
65、培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？
一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。
66、培养基及其它添加物和试剂可反复冻融吗？
大部分添加物和试剂最多可以冻融3次，如果次数更多都会在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，将会影响它的性能。
67、为什么要在溶解的一周内使用贮存在4 ℃冰箱中的液体胰蛋白酶溶液?
胰蛋白酶在4 ℃就可能开始降解，如果在室温下放置超过30分钟，就会变得不稳定。
68、保存血清最好的方法?
我们建议血清应保存在-5 ℃至-20 ℃。若存放于4 ℃时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。
69、如何解冻血清才不会使产品质量受损?
将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8 ℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。
70、 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理?
血清中沉淀物的出现有许多种原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的原因之一。但这些絮状沉淀物，并不影响血清本身的质量。
若欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400 g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。最好不使用过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞过滤膜。
71、为什么要热灭活血清?
加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养ES细胞、平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。
72、有必要做热灭活吗?
实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37 ℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。
若非必须，可以不需要做热处理这一步。不但节省时间，更确保血清的质量。
73、为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀?
有些胎牛血清产品没有预老化，储存在2－8 ℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。推荐在－20 ℃储存胎牛血清，避免反复冻融。
74、如何避免沉淀物的产生?
我们建议您在使用血清的时候，注意下列的操作:
(1)解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-20 ℃至4 ℃至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37 ℃)，非常容易产生沉淀物。
(2)解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。
(3)请勿将血清置于37 ℃太久。若在37 ℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。
(4)血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。
(5)若必须做血清的热灭活，请遵守56 ℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。
75、 液体培养基的保存是冷藏好？还是冷冻好？
要冷藏！因为液体培养基经冷冻后再经溶化时，其溶液的pH值会发生改变，溶液往往变碱，某些成分溶解也会受到影响对细胞生长不利。故液体培养基一定要存放在冷藏箱中，通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月 ~ 一年。
76、 液体培养基中谷氨酰胺的作用，及使用方法。
几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。所以，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置-20 ℃冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4 ℃冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。基础医学细胞中心在其服务项目中配制分装了高浓度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1 ml/支）。每支1 ml的谷氨酰胺加到99 ml完全培养基中，其终浓度为2 mM/ml培养基。包装为粉红色，-24 ℃保存。
77、培养用液pH对细胞生长的影响
由于，大多数细胞适宜pH为7.2~7.4，偏离此范围对细胞将产生有害的影响。各种细胞对pH的要求也不完全相同，原代培养细胞一般对pH变动耐受差，无限细胞系耐受力强。
但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些，偏酸环境中更利于细胞生长。因此，我们在配制培养用液时，可把液体的pH稍微调得偏酸一些。液体在经过0.10 um或0.22 um滤膜过滤时，溶液的pH还会向上浮动0.2左右。
78、常用培养基及培养用液的渗透压范围
培养基名称 渗透压范围（mOSM）
DMEM（高糖） 315 ~ 350
DMEM（低糖） 270 ~ 330
RPMI-1640 260 ~ 290
MEM-EBSS 280 ~ 310
MEM-NEAA 280 ~ 310
McCoy5a 280 ~ 310
MEM-a 280 ~ 310
M-199 275 ~ 305
IMDM 270 ~ 300
DMEM/F-12 280 ~ 310
F-10 270 ~ 300
F-12 275 ~ 300
培养基名称 渗透压范围（mOSM）
L-15 280 ~ 320
D-Hanks 280 ~ 300
Hanks 280 ~ 300
PBS 275 ~ 300
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