病毒颗粒的等电位滴定曲线用于指导离子交换层...（二）
结果和讨论
为确保CyDye标记不对病毒电荷行为产生较大影响，已检验过的两种病毒载体在未标记之前也在琼脂糖ETC上分离。凝胶被染色[15]，并且在迁移模式上仅观察到有轻度的改变（数据未列出）。
以Cy™5标记的腺病毒(AV)的琼脂糖凝胶电泳表明，AV在pH值从5至10的范围内整体来说表面带负电荷，而在pH低于5时带正电荷（图1）。这与组成腺病毒的六联体、五联体和纤维蛋白的等电点相一致[16]。为确定有助于纯化的pH范围，也采用电泳法将未标记的原材料分离出来，并以SYPRO Ruby染色（数据未列出）。
在pH值为8的Q Sepharose XL上能从粗培养液中将病毒分离出来（图2）。可以使用较低的pH值；然而，结合能力将受影响。
在pH为8时，缓冲液A中能使用达300 mM的NaCl，但是这样与在缓冲液A中无NaCl时进行的分离相比，柱子的结合能力会降低一半（数据未列出)。
图1、腺病毒标记的Cy5在2%琼脂糖
IEF凝胶、pH梯度为3-10中的琼脂糖
凝胶电泳图。阴离子和阳离子交换（分
别为AIX、CIX）的等电位点及可能的
pH范围如图所示。
层析柱： Q Sepharose XL，置于 XK 16/10 层析柱中
样本： 重组腺病毒 Ad5 CMV-GFP
样本体积： 5 ml，置于缓冲液 A 中
缓冲液 A： 50 mM TrisCl (pH 8.0)，5%甘油
缓冲液 B： 缓冲液 A+1M NaCl
梯度： 0-100%缓冲液 B，20CV
流速： 150 cm/h（5ml/min）进样 30cm/h（1ml/min）
系统： ÄKTAexplorer 10
检测波长： 260 和 280 nm
图2、采用阴离子交换对细胞裂解产物中的腺病毒进行分离。上样前采用Benzonase™核酸内切酶处理裂解物。箭头为腺病毒峰。其纯度与采用CsCl离心处理的两次纯化相当。
图3、紫外线灭活Cy3标记麻疹病毒
在2%琼脂糖凝胶、pH梯度为3-10
中的分离，pI，pH值和上样槽如图
所示。
图4、采用ETC在pH范围为3-9的
IEF凝胶中对病毒样本进行的分析。
凝胶采用SYPRO Ruby染色， 采
用Typhoon扫描仪对电泳带进行
检测。
