圆二色谱分析对卵清蛋白二级结构的影晌
圆二色谱分析动态超高压微射流均质对卵清蛋白二级结构的影晌
圆二色光谱(简称CD)是目前应用最为广泛的测定蛋白质二级结构的方法，是研究稀溶液中蛋白质构象的一种快速、简单、较准确的方法。它可以在溶液状态下测定，较接近其生理状态。而且测定方法快速简便，对构象变化灵敏，所以它是目前研究蛋白质二级结构的主要手段之一，并已广泛应用于蛋白质的构象研究中186]。蛋白质是由氨基酸通过肤键连接而成的具有特定结构的生物大分子。在蛋白质中，氨基酸的a一碳原子是不对称碳原子，具有光学活性，蛋白质的肤链走向也是不对称的结构，也具有光学活性，当平面圆偏振光通过这些光活性的生色基团时，光活性中心对平面圆偏振光中的左、右圆偏振光的吸收不相同，产生了吸收差值，由于这种吸收差的存在，造成了偏振光矢量的振幅差，圆偏振光变成了椭圆偏振光，这就是蛋白质的圆二色性。通过测定蛋白质溶液的圆二色性，可以研究蛋白质的二级结构及其变化信息[87一l。一般蛋白质的圆二色光谱分为两段，波长范围在185一245Inn称为远紫外区，245一320nln称近紫外区。具有不同二级结构的蛋白质或多肤所产生的CD谱带的位置、吸收的强弱都不相同。a一螺旋结构在靠近192Inn有一正的谱带，在222和208nm处表现出两个负的特征肩峰谱带;p一折叠的CD谱在216nm有一负谱带，在185一Zoonln有一正谱带;p一转角在206lun附近有一正CD谱带。远紫外区是蛋白质肤链的吸收峰，反映了主链的构象。因此，可利用这一区域的CD光谱推算蛋白质分子中的a一螺旋、p一折叠、p一转角以及无规卷曲的含量191]。本实验利用圆二色光谱分析经动态超高压微射流均质处理后的卵清蛋白的二级结构变化情况。下图分别为经不同均质压力处理后的卵清蛋白的圆二色谱图。
图4.24一图4.28分别为不同压力处理的卵清蛋白与对照组的CD谱。可以看出，不同压力对卵清蛋白CD谱的影响程度不同。与未处理的样品相比，经不同压力处理后卵清蛋白CD谱曲线，谱峰峰位和峰高均发生了不同程度的变化。由图4.22中可知，未处理的卵清蛋白样品的CD谱在208nm和222nm附近处有两个宽负峰谱带;在190一202lun有一正谱带。从各谱峰位及峰形来看，说明卵清蛋白以多种构象共存，并以a一螺旋结构为主。经不同压力处理后，在192run出现明显的正峰谱带，并且在192tun和222nm处峰强有所提高，而在190nm处，峰强减小，这说明经高压均质处理后卵清蛋白的a一螺旋的含量有所增加(这与红外光谱的结果相一致)，p一折叠有所减少。将CD图谱与、认ng氏参照CD光谱拟合后估算出卵清蛋白二级结构中a一螺旋，p一折叠，p一转角和无规卷曲所占的比率。.圆二色谱的结果表明，动态超高压微射流均质使卵清蛋白的二级结构发生了变化。a一螺旋含量增加，既a一螺旋结构有所展开，并发生去折叠现象。且过高的压力使卵清蛋白的a一螺旋和p一转角又向p一折叠转化。
(10)圆二色谱分析
用JASCOJ一810旋光仪旧本JASCO公司)测定卵清蛋白的远紫外圆二色谱变化170]。旋光仪与电脑连接以Jasco软件操作。将经过处理后卵清蛋白溶液注入0.Icm厚的椭圆形比色皿中，在25℃和连续充氮的条件下，进行远紫外区域190一250nm)扫描，速度为50nln/min，光谱间隔0.Inln，3次累积。由仪器提供的、认ng氏参照CD光谱估算卵清蛋白二级结构中a螺旋，p折叠，p转角和无规卷曲所占的比率。
