总RNA提取实验——CsCl法
实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 一、 用于单层培养细胞
1. 室温下用PBS冼涤细胞,每平皿用5 ml,洗2次。
二、用于悬浮培养细胞
1. 用JS-4,2转子离心回收≤108细胞,重悬于相当于1/2原有体积的PBS,并再次离心回收细胞。
2. 往离心管中加入3.5 ml 异硫氰酸胍溶液。
3. 用装有20-G针头的6注射器将粘稠的细胞裂解液注返抽吸4次,并将其移至一个干净的试管中。
4. 在经硅化并高压过的13 mmx51 mm 的异质同晶聚合物超离心管中,加入1. 5 ml 5.7mol/l CsCl。
6. 于18℃用Beckman SW-55转子150 000 g 离心12~20 h(缓慢加速和减速)。
9. 晾干沉淀约5~10 min,然后以360 ul TES溶液重溶沉淀,反复地以吸管上下抽吸。 |
注意事项 | 1. 1~5步的操作均在室温进行。 |