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细胞骨架观察实验—抗管蛋白免疫染色法

2019.4.04

实验方法原理	细胞骨架微管的主要成分主要为管蛋白（Tublin），用免疫荧光法能显出其清晰结构。
实验材料	细胞
试剂、试剂盒	PBS 丙酮甲醛
仪器、耗材	碟皿恒温箱
实验步骤	1. 细胞培养用支持物细胞培养法，把细胞培养在小盖片上； 2. 漂洗用镊子挟出小盖片，在温PBS中漂洗3 次，每次30 秒； 3. 固定在室温中用PBS配的3 %甲醛液固定20 分钟； 4. 漂洗从固定液中取出，仍用温PBS漂洗3 次，每次1 分钟，最后在滤纸上吸干多余的PBS； 5. 过丙酮投入冷丙酮中（－10 ℃～－20 ℃），令细胞面向上，作用7 分钟； 6. 漂洗：同4； 7. 抗体处理取一直径6 厘米干净的碟皿，向皿中央滴1 滴浓度为0.1～0.2 mg/ml的一级抗管蛋白抗体，令小盖片细胞面向下扣在抗体液上，覆以皿盖，置37 ℃温箱中45 分至1 小时（内有水盒以避免抗体液蒸发干掉）； 8. 漂洗向碟皿内徐徐滴加PBS，令盖片浮起在液面，用镊子挟出，按4处理； 9. 二级荧光抗体处理按7进行（荧光抗体常用羊抗兔抗体）； 10. 漂洗按8和4处理，封片；取一大载物片，用滤纸剪一纸框置于载物片上向纸框中滴甘油/PBS（pH8.5，PBS 1 分加甘油9 分）少许，把小盖片置入框中再覆以大盖片；置荧光显微镜下观察。展开
注意事项	荧光抗体有市售品，如无，也可参阅免疫学技术自制。

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