单克隆抗体捕获步骤工艺开发的快速入门（一）
在单克隆抗体纯化中，为了获得所需高质量的抗体，一般使用两步或三步层析步骤。通常，用于三步工艺的层析介质为Protein A→阳离子交换→阴离子交换；用于两步工艺的层析介质为Protein A→Capto adhere（多模式离子交换）。所有的单克隆抗体（Mabs）都有一些相似的特性，所以可以使用同一个平台方法纯化。请注意，平台并不意味着相同的工艺，它只是表示工艺的某些方面不需要从头开始开发，因为可以利用以前单克隆抗体工艺开发经验。
本次讨论的目的是提出一种纯化工艺，它可以用于哺乳动物细胞生产的大多数Mabs的纯化工艺。这里我们介绍一种基于MabSelectTMSuRe层析介质做工艺开发的一般起始建议（未优化）。
MabSelectTMSuRe 是一种Protein A层析介质，耐受苛刻和具有成本效益的CIP程序，即0.1-0.5 M NaOH。
用于工艺开发的推荐途径是使用高通量工艺开发(HTPD)--使用PreDictor™96孔板可以在短时间内评估大量的层析参数（参考文献1）。然后最佳工艺参数被放大，即HTPD→实验室规模→中试车间→生产。这种方法提供了大量的对于Quality by Design (QbD)方法尤其有用的数据。甚至当使用HTPD时，下一个表格中的一些信息可以作为起点使用。
系统 | 控制 | 层析介质 | 层析柱 | 床高度(cm) | CV(ml) |
ÄKTA™ avant 25或150 | UNICORN™ 6 | MabSelect SuRe | Tricorn™ 10/200 | 20 | 15.71* |
用于MabSelect SuRe捕获步骤的层析方法
步骤 | 体积或时间 | 缓冲液组成 | 保留时间，分钟（线性流速，cm/hr） |
0.仅在保存后-平衡 | 3 CV | 20 mM 磷酸钠, 0.15M NaCl, pH 7.4 | 7.5 (160 cm/hr) |
1.平衡 | 0.25 CV | 20 mM 磷酸钠, 0.15M NaCl, pH 7.4 | 3.4 (350 cm/hr) |
2.上样 | 5%穿透时80%的动态载量 | 按需要 | 2.4-4.8 (500-250 cm/hr) 长保留时间 → 高结合容量 |
3.清洗 | 3 CV | 20 mM 磷酸钠, 0.15M NaCl, pH 7.4 | 2.4-4.8 (500-250 cm/hr) |
4.中间清洗 | 2 CV | 25 mM 磷酸钠, 0.5M NaCl, pH 7.0, (5%异丙醇, 可选) | 3.4 (350 cm/hr) |
5.清晰 | 3 CV | 20 mM 磷酸钠, 0.15M NaCl, pH 7.4 | 3.4 (350 cm/hr) |
6.洗脱 | 经过紫外检测器控制或在预先测定的体积处 | 0.1 M 乙酸, pH 2.9** | 3.4 (350 cm/hr) |
7.CIP | 2 CV=15min | 0.1M NaOH | 7.5 (160cm/hr) |
8.再平衡 | 3 CV | 20 mM 磷酸钠, 0.15 M NaCl, pH 7.4 | 3.4 (350 cm/hr) |
9.仅在最后一轮运行后-保存 | 4 CV | 20% 乙醇 | 7.5 (160 cm/hr) |
注释：除了上样步骤外，对于其他步骤可以把流速提高至500 cm/hr；
大约总的循环时间*** ~ 17CV x 2.4 min/CV + 11CV x 3.4min/CV + 2 CV x 7.5 min/CV ~ 95min ~ 1.6小时。即使你做两次，总时间大约为3.2小时。没有生产中的限速步骤。
