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蛋白质分离和分析——免 疫 印 迹 和 免 疫 检 测

2019.4.06
实验步骤

基 本 方 案 1 液体容器中的蛋白质印迹

材 料

待分析样品

标准分子质量蛋白质,预 染 型(Sigma 或 Bio-Rad) 或 生 物 素 化 型(Vector labs 或Sigma)

转移缓冲液

无粉手套

Scotch-Brite 垫 片(3M ) 或类似海绵

Whatman 3M M 滤纸或类似物

转 移膜:0.45um 硝 酸 纤 维 素 膜(Millipore 或 Schleicher& Schuell), P V D F 膜(Millipore Immobilon P ) ,中 性 尼 龙 膜(Pall Biodyne A ),或者正电荷尼龙膜(Pall Biodyne B ; Bio-Rad Zetabind)

电 印 迹 装 置(E C 装置, Bio-R a d 或 Hoefer)

不可擦拭圆珠笔或软笔芯铅笔

1.准备抗原样品,用小型或标准大小单向或双向凝胶分离蛋白质,上样时将预染的或生物素化的标准分子质量蛋白质上一道或多道。

2.电 泳 结 束 后 ,拆 除 凝 胶 板 去 除 上 层 胶 ,在 室 温 下 用 适 量 转 移 缓 冲 液 将 凝 胶 平衡 30 min。

3 . 准备一个足够大的盘置放塑料转移盒,盘中注满转移缓冲液将盒覆盖。

4 . 按 照 图 12. 5.1 所 示 ,在塑料转移盒的底部一边放置 Scotch-Brite 垫片或海绵,再放上一张用转移缓冲液润湿的与凝胶同样大小的滤纸,在滤纸上放上凝胶,用试管轻轻地在凝胶表面卷动以赶走凝胶和滤纸之间的气泡。

5 . 剪一张两边缘比凝胶宽 1〜2m m 的转移膜,将硝酸纤维素膜和尼龙膜呈 45°角慢慢放






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