新城疫抗体检测试剂盒操作方法和技术注意事项
新城疫抗体检测试剂盒（阻断法）操作方法和技术注意事项
【产品名称】
通用名：新城疫病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Newcastle Disease Virus （ELISA）
【预期用途】 新城疫又名伪鸡瘟或亚洲鸡瘟，是由新城疫病毒（Newcastle Disease Virus，NDV）引起的禽类的一种急性高度接触性传染病，以呼吸困难、下痢、神经机能紊乱、粘膜出血为特征。
本试剂用于检测鸡、鸭、鹅等禽类血清、血浆或蛋黄中新城疫病毒抗体，可用于免疫效果评价、辅助诊断等。
【原 理】
本试剂盒系由预包被新城疫病毒抗原的酶标板、抗体工作液、酶标记物及其他配套试剂组成，应用竞争酶联免疫法原理检测禽类血清、血浆或蛋黄中新城疫病毒抗体。实验时在酶标板中加入稀释的待检样本和抗体工作液，若样品中含有新城疫病毒抗体则将阻断抗体工作液与酶标板上抗原结合，从而使后续反应不出现显色；反之则出现显色；显色深浅与样品中的特异性抗体含量成负相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有新城疫病毒抗体。
【试剂盒组成】
| 序号 | 名称 | 规格（96T×1） | 规格（96T×2） |
| 1. | 酶标板 | 96T×1 | 96T×2 |
| 2. | 酶标记物 (红盖) | 11ml×1 | 11ml×2 |
| 3. | 抗体工作液 (蓝盖) | 5.5ml×1 | 11ml×1 |
| 4. | 20X浓缩洗涤液 | 40ml×1 | 40ml×1 |
| 5. | 底物液A (白盖) | 6ml×1 | 11ml×1 |
| 6. | 底物液B (黑盖) | 6ml×1 | 11ml×1 |
| 7. | 终止液 (黄盖) | 6ml×1 | 11ml×1 |
| 8. | 阳性对照 (红盖) | 1.0 ml×1 | 1.5 ml×1 |
| 9. | 阴性对照 (绿盖) | 1.0 ml×1 | 1.5 ml×1 |
| 10. | 盖板膜 | 1张 | 2张 |
| 11. | 自封袋 | 1个 | 1个 |
| 12. | 说明书 | 1份 | 1份 |
【储存及有效期】 于2～8℃避光保存，有效期为12个月。
包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。
【适用仪器】 含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。
【样品准备】
浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水20倍稀释成工作洗涤液。
血清/血浆：取动物全血按常规方法制备血清或血浆，要求血清/血浆清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。
蛋黄：取2ml新鲜蛋黄加2ml生理盐水震荡混匀，3000转/分钟离心15分钟，取上清作为样本。
3.用工作洗涤液将待检血清、血浆或已处理蛋黄样本按5倍稀释（如10μl样本加入40μl工作洗涤液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。
【检验方法】
使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条，设阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。
3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照50μl；样品孔每孔加入稀释后的样品50μl。
4.每孔加抗体工作液50μl，混匀，置37℃反应30分钟。
5.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。
6.每孔加酶标记物100μl，置37℃反应30分钟。
7.洗涤，同步骤5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，37℃避光反应15分钟。
9.每孔加终止液50μl，混匀，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值）。
【参考值】实验正常的情况下，阴性对照吸光值≥1.0，阳性对照吸光值≤阴性对照吸光值×50%。
【检验结果的解释】
PI（阻断率）=（1-样本值/阴性对照孔均值）×100%，PI≥50%为阳性；PI＜50%为阴性。
2.未曾免疫鸡群：结果为阳性时表明可能有感染，需结合临床资料进行分析。
3.免疫鸡群：监测并记录样本当时的抗体水平，根据结果分析抗体水平的分布及鸡群免疫状态的动向。
【试验方法的局限性】
该试验仅作为定性检测新城疫病毒抗体，根据PI值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。
【注意事项】
实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。
2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。
4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。
5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。
6.用于检测的样品应保持新鲜。
7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
8.不同批号试剂组分不得混用。
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