酶联法检测血吸虫抗体
酶联法检测血吸虫抗体
[检测方法] ELISA法
[方法学原理]
将血吸虫可溶性抗原与固相载体联结形成固相抗原，加待检血清，如血清中有特异性抗体则与固相抗原相结合，形成固相抗原抗体复合物；再加HRP标羊抗人IgG抗体，形成固相抗原—抗体—羊抗人IgG酶标记抗体复合物，在此基础上加酶底物显色，颜色深度与抗体含量成正比。
[标本准备] 不抗凝静脉血2ml
[试剂]
1．日本分体血吸虫可溶性抗原
2．HRP标记羊抗人IgG
3．0．05mmol／LpH9．6碳酸盐缓冲液
4．稀释液和洗涤液
5．酶底物液
6．2mol／LH2504溶液
7．正常人(阴性对照)血清
[检测步骤]
1．日本血吸虫可溶性虫卵抗原用pH9．6碳酸盐缓冲液作1：3 000稀释，包被反应板，每孑岫口lOOtA，置4℃环境中过夜。
2．用前洗涤包被板3min× 3，加被检血清，每份标本做3孔，每孔lOOgl，另加正常人(阴性对照)血清2孔。37C环境中保温2h，洗涤3minX3。
3．加HRP-抗人IgG，每孔100gl，37℃环境中放置2h，洗涤3rainX3。
4．加酶底物液每孔100~1，于室温环境中避光保存30min，各孔加2mol／L H2S04 1滴终止反应，用酶标比色仪490nm测各孔A值。
[参考范围] 血吸虫抗体阴性
[注意事项]
1．待检血清应新鲜或冰冻保存，不能污染。
2．在实验室的全部洗涤过程中，清洗要彻底，以除去末参与反应的所有物质。
3．试剂盒应保存于4一-20C冰箱中，用前取出，待试剂恢复至室温后使用。
[临床意义]
粪便中虫卵阳性者血清中抗体检出率为97％以上，正常人有2％～3％假阳性。不同种属寄生虫无明显交叉反应。1979年，Tamaka应用ELISA间接法测日本分体血吸虫患者抗体阳性率为100％。本法具有高度的敏感性，但有1％一2．3％假阳性，对同种属曼氏和埃及血吸虫有交叉反应。
