荧光pH探针于细胞内pH检测的使用（二）
 |
 |
| pH 6.0 | pH 8.5 |
图2. 用RatioWorks™BCFL，AM标记的Hela细胞。将Hela细胞与5 µM RatioWorks™BCFL，AM（Cat# 21190）在37°C 下孵育30分钟。使用显微镜FITC滤光片捕获图像。将BCFL，AM溶液与Hela细胞一起温育，结果显示RatioWorks™BCFL，AM和染色的细胞质均被均匀摄取。
表1. 接近中性pH环境的比值型荧光pH探针
| 指示剂 | Ex（nm） | Em（nm） | pKa | 规格 | 货号 |
| RatioWorks™BCFL，AM | 454、503 | 528 | 〜7 | 1mg | 21190 |
| RatioWorks™BCFLAcid | 454、503 | 528 | 〜7 | 1mg | 21189 |
| RatioWorks™BCFL，SE | 454、503 | 528 | 〜7 | 1mg | 21191 |
| Cell Meter™荧光细胞内pH检测试剂盒 | 430、505 | 535 | 〜7 | 1000 Tests | 21180 |
| CytoFix™BCECF，AM *长期细胞pH示踪剂* | 440、504 | 527 | 〜6.98 | 1mg | 21202 |
| BCECF，AM | 440、504 | 527 | 〜6.98 | 1mg | 21202 |
| BCECF，AM *超纯级* | 440、504 | 527 | 〜6.98 | 20x50 µ | 21203 |
| BCECF acid * CAS＃：85138-49-4 * | 440、504 | 527 | 〜6.98 | 1mg | 21201 |
2. 酸性pH检测和内吞
嗜酸探针，例如PDMPO和AAT Bioquest Protonex™染料，具有独特的特性，非常适合测量活细胞中偏酸性的细胞器的pH。作为弱碱，由于质子化这些染料能够选择性地在溶酶体和其他酸性隔室内积累。这种质子化不仅减少了背景干扰，还激活了其pH依赖性的荧光。
RatioWorks™PDMPO，双重激发|双重发射比值型pH探针
RatioWorks™PDMPO是具有酸性双激发和双发射pH探针， 它的pKa〜4.47和独特的pH依赖性荧光是测量酸性细胞器pH的理想选择。在接近中性的条件下，当以最大激发光（〜333 nm）激发时，RatioWorks™PDMPO会在〜450 nm处发出强烈的蓝色荧光。然而，在更酸性的环境中，该荧光在〜550 nm处迅速转变为深黄色。RatioWorks™PDMPO在〜386 nm处也表现出二次激发最大值。这使得能够在配备有紫色激光的流式细胞仪上进行细胞内pH测量。RatioWorks™PDMPO已成功地用作生物硅化过程中的示踪剂，并已广泛应用于二氧化硅相关研究中。
 |
 |
| PDMPO激发光谱 | PDMPO发射光谱 |
Protonex™染料，酸性pH指示剂
Protonex™Green 500和Protonex™Red 600是AAT Bioquest开发的新型pH敏感荧光染料，用于监测酸性细胞区室（例如内体和溶酶体），从而减少了信号变异性并提高了准确性。在接近中性的环境中，Protonex™染料基本上是无荧光的。直到暴露在酸性环境中，Protonex™染料的荧光强度才会增加。Protonex™Green 500的最佳激发和发射最大值分别为〜445 nm和〜503 nm，而Protonex™Red 600在〜575 nm处激发并在〜597 nm处发射。Protonex™染料可以作为胺反应性琥珀酰亚胺酯用于标记蛋白质和抗体，也可以与葡聚糖或乳胶珠偶联以研究内吞途径。
 |
 |
| Protonex™Green 500激发光谱 | Protonex™Red 600发射光谱 |
Protonex™染料的主要特点：
Protonex™Green 500和Protonex™Red 600的pKa约为6.5
Protonex™染料在中性pH下不发荧光，随着酸化作用荧光强度增加
成功追踪活细胞内化作用并监测吞噬和内吞途径
在中性pH值下染料荧光最弱，无需清洗步骤
适用于与其他荧光染料和缀合物的多重分析
用于荧光显微镜，流式细胞仪，荧光计等
图3.通过Protonex™Red 600-Latex珠缀合物（Cat# 21209）检查了RAW 264.7细胞中的吞噬作用。将RAW 264.7细胞与Protonex™600 Latex Beads在生长培养基中孵育4小时。CytoTrace™Green CMFDA（Cat# 22017）用于追踪活细胞。使用Keyence荧光显微镜拍摄图像（20X）。
表2.适用于酸性pH环境的比值型和单波长荧光pH指示剂
| 指示剂 | Ex（nm） | Em（nm） | pKa | 规格 | 货号 |
| RatioWorks™PDMPO，AM | 333 | 450、531 | 约4.47 | 1mg | 21204 |
| RatioWorks™PDMPO Dextran * 10,000 MW * | 333 | 450、531 | 约4.47 | 1mg | 21211 |
| RatioWorks™PDMPO，SE | 333 | 450、531 | 约4.47 | 1mg | 21210 |
| Protonex™Green 500 | 445 | 503 | 约6.5 | 1mg | 21215 |
| Protonex™Green 500 WS | 445 | 503 | 约6.5 | 1mg | 21218 |
| Protonex™Green 500，SE | 445 | 503 | 约6.5 | 1mg | 21216 |
| Protonex™Green 500葡聚糖 | 445 | 503 | 约6.5 | 1mg | 21217 |
| Protonex™红色600 | 575 | 597 | 约6.5 | 1mg | 21207 |
| Protonex™Red 600，SE | 575 | 597 | 约6.5 | 1mg | 21208 |
