详述补体结合试验
补体结合试验中有5种成分参与反应，分属于3个系统：①反应系统，即已知的抗原（或抗体）与待测的抗体（或抗原）；②补体系统；③指示系统，即SRBC与相应溶血素，试验时常将其预先结合在一起，形成致敏红细胞。反应系统与指示系统争夺补体系统，先加入反应系统给其以优先结合补体的机会。
如果反应系统中存在待测的抗体（或抗原），则抗原抗体发生反应后可结合补体；再加入指示系统时，由于反应液中已没有游离的补体而不出现溶血，是为补体结合试验阳性。如果反应系统中不存在的待检的抗体（或抗原），则在液体中仍有游离的补体存在，当加入指示系统时会出现溶血，是为补体结合试验阴性。因此补体结合试验可用已知抗原来检测相应抗体，或用已知抗体来检测相应抗原。
补体结合试验的改良方法较多，较常用的有全量法（3ml）、半量法（1.5ml）、小量法（0.6ml）和微量法（塑板法）等。目前以后两种方法应用较为广泛，因为可以节省抗原，血清标本用量较少，特异性也较好。以下叙述以小量法为例，即抗原、抗体、溶血素、羊红细胞各加0.1ml，补体加0.2ml，总量为0.6ml。
（l）巴比妥缓冲液（BBS）：称取氯化钠85.0g，氯化镁六水合物1.68g，氯化钙0.28g，巴比妥5.75g，巴比妥钠2.0g，先将巴比妥加入500ml水中加热溶解后，再加其他成分，补加水至2000ml，此为保留液，用时稀释5倍。
（2）抗体（溶血素）：应无抗补体现象，国内有商品供应。
（3）2%羊红细胞：用生理盐水离心洗涤后，用BBS配成2%悬液。
（4）补体：豚鼠血清。
1．抗原试验中用于检测抗体的抗原应适当提纯，纯度愈高，特异性愈强。如使用粗制抗原时，须经同样处理的正常组织作抗原对照，以识别待检血清中可能存在的、对正常组织成分的非特异性反应。
2．抗原和抗本的滴定补体结合试验中，抗原与抗体按一定比例结合，因而应通过试验选择适宜的浓度比例。多采用方阵法进行滴定，选择抗原与抗体两者都呈强阳性反应（100％不溶血）的最高稀释度作为抗原和抗体的效价（单价）。滴定方法举例如表14-4。在试管中加入不同稀释度的抗原，配加不同稀释度的抗血清，另作不加抗原的抗体对照管和不加抗血清的抗原对照管。按照试验方法加补体和指示系统，温育后观察结果。在表14-4中可见1:64抗原和1:32抗体各作为1个单位。在正式试验中，抗原一般采用2～4个单位（1:64～1:32），抗体采用4个单位（1:8）。
3．补体滴定按表14-5逐步加入各试剂，温育后观察最少量补体能产生完全溶血者，确定为1个实用单位，正式试验中使用2个实用单位。如形14-5中的结果为1:60的补体0.12ml可产生完全溶血，按比例公式0.12×2:60＝0.2:X计算，X＝50；即实际应用中的2个补体实用单位应为1:50稀释的补体0.2ml。
采集血液标本后及时分离血清，及时检验或将血清保存于－20℃。血清在试验前应先加热56℃30min（或60℃3min）以破坏补体和除去一些非特异因素。血清标本遇有抗补本现象时可做下列处理之一：①加热提高12；②－20℃冻融后离心去沉淀；③以3mmol/L盐酸处理；④加入少量补体后再加热灭活；⑤以白陶土处理；⑥通入CO2；⑦以小白鼠肝粉处理；⑧用含10％新鲜鸡蛋清的生理盐水稀释补体。
溶血素的滴定：
①取补体1ml，加BBS 9ml，依次稀释成1∶20，1∶30，1∶40，1∶50，1∶60，1∶80，1∶100，1∶200，1∶400，同时取50%的溶血素0.2ml，加BBS 9.8ml，即为1∶100的溶血素，然后继续稀释成1∶800，1∶1600，1∶3200，1∶6400。
②采取方阵排列试管，纵行各管加不同浓度的补体0.1ml，横排各管加溶血素0.1ml（皆应从最高稀释度加起）混匀后，各管加BBS 0.2ml，补体和溶血素对照管各加BBS 0.3ml，最后在各管中加2%羊红细胞0.1ml。各管总量为0.5ml，摇匀，放37℃水箱中30min，观察结果。以完全溶血的补体和溶血素最高稀释度为各自的单位。在实际应用时，溶血素用2U（3200÷2=1600），补体用2.5U（80÷2.5＝32）。
（2）正式试验：
①用V型微量反应板操作，每份标本作一个试验孔。一个血清对照孔。各孔内先加BBS 0.025ml。②用稀释棒蘸取血清（0.025ml）加入第一孔，旋转后移入第二孔，共八孔，如此可得1∶2～1∶256稀释。③按表2加入各试剂：
以小量法测定抗体的补体结合试验为例。按表14-6逐步加入各种试剂，温育后先观察各类对照管，应与预期的结果吻合。阴性、阳性对照管中应分别为明确的溶血与不溶血；抗体或抗原对照管、待检血清对照管、阳性和阴性对照的对照管都应完全溶血。绵羊红细胞对照管不应出现自发性溶血。补体对照管应呈现2U为全溶，1U为全溶略带有少许红细胞，0.5U应不溶。如0.5U补体对照出现全溶表明补体用量过多；如2U对照管不出现溶血，说明补体用量不够，对结果都有影响，应重复进行试验。补体结合试验结果，受检血清不溶血为阳性，溶血为阴性。补体结合试验是一种传统的免疫学技术，能够沿用至今说明它本身有一定的优点：①灵敏度高。补体活化过程有放大作用，比沉淀反应和凝集反应的灵敏度高得多，能测定0.05μg/ml的抗体，可与间接凝集法的灵敏度相当。②特异性强。各种反应成分事先都经过滴定，选择了最佳比例，出现交叉反应的机率较小，尤其用小量法或微量法时。③应用面广，可用于检测多种类型的抗原或抗体。④易于普及，试验结果显而易见；试验条件要求低，不需要特殊仪器或只用光电比色计即可。
补体结合试验可应用在以下几方面：①传染病诊断。病原性抗原及相应抗体的检测。②其他抗原的检测。例如肿瘤相关抗原、血迹中的蛋白质鉴定、HLA分型等。③自身抗体检测。
但是补体结合试验参与反应的成分多，影响因素复杂，操作步骤繁锁并且要求十分严格，稍有疏忽便会得出不正确的结果，所以在多种测定中已被其他更易被接受的方法所取代。但对于免疫学技术的基本训练仍是一个很好的试验。
