P1噬菌体介导的普遍性转导（generalized transduction）-1
一、原理
大肠杆菌可以利用噬菌体为媒介，将供体细胞DNA转移给受体细胞，从而使受体细胞的基因型和表现型发生改变，这一过程称为转导。由类似噬菌体P1和P2介导的转导，能够转移供体染色体上任何一个基因，称为普遍性转导；由λ噬菌体等为媒介的转导，只能转导半乳糖发酵基因等少数基因，称为局限性转导。
P1噬菌体的DNA分子量为5.8×107D，大约相当于大肠杆菌染色体的2％。在转导过程中，它的外壳中几乎只包装着寄主菌的染色体片断。假如大肠杆菌染色体的全长是100分钟，则P噬菌体外壳中包装的DNA片段最多可以带有相隔两分钟范围内的寄主基因。可以想象，包装时寄主染色体的断裂是随机的，两个基因相隔愈近，共转导的机率愈高。如果两个基因密切连锁，共转导的频率将接近1；相距很远，其共转导频率就接近或等于0。共转导频率（X）＝(1-d/L)3,d为以分钟计算的转导DNA的长度。利用这种关系可以进行两个距离很近的基因的定位，也可用来进行基因精细结构分析。位置非常接近的一系列拟等位突变位点也可以通过其转导测得它们的排列顺序。
由于转导的频率一般很低，大约每个感染细胞只有10-4－10-5。因此常用的方法是选取某一选择性标记的转导子，然后测定另一基因的出现频率，根据公式计算，确定它们之间的连锁关系。
二、目的
了解大肠杆菌普遍性转导的现象、原理和普遍性转导在细菌基因精确定位中的作用，掌握普遍性转导和基因定位的基本方法。
三、材料
1、受体菌：CSH1F- trp lacZ thi strA
2、供体菌：FD1009Hfr sup tsx。
3、噬菌体P1 cml, clr1000裂解液(109ml)
4、噬菌体T6裂解液
5、生理盐水稀释管(4.5ml／支)
6、0.1mol/L CaCl2
7、LB液体(5ml/支)、半固体(3ml/支)和固体培养基
8、氯仿
9、乳糖色氨酸基本培养基、葡萄糖基本培养基、葡萄糖色氨酸基本培养基
10、培养皿、三角瓶、试管、离心机、灭菌牙签、吸管、接种环、酒精灯。
四、实验步骤
（一）Pl cml, clr100裂解液的制备
1、第一天，接种供体菌株于LB液体培养基中，30℃培养过夜。
2、第二天，将供体菌液用LB培养液按1：5稀释，30℃继续培养2小时。然后吸取0.2ml供体菌和0.1ml、10-2的噬菌体原液（滴定度为109/ml左右，细菌和噬菌体数目比大约为20：1）与3ml半固体LB培养基混匀后，倒在LB固体培养基上，凝固后37℃培养过夜。每组做3－4皿。其中有一皿不加噬菌体作为对照。
