大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ Klenow片段实验—随即寡核苷酸引物介导
| 实验方法原理 | 此法是一种用以产生高放射比活、放射标记均匀分布的04八片段的切口平移方法。 |
|---|---|
| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 1. 用合适的限制性内切酶消化DNA，DNA片段经电泳纯化或乙醇沉淀，用TE缓冲液重悬。 2. 在冰浴中混合下列物质：
3. 将30~100 ng DNA与随机核苷酸六聚体（1~5 μg）混合至14 μl，煮沸2~3 min，置于冰浴。
4. 加入11 μl 得自步骤2的混合物，立即在室温温育2~4 h。
5. 加入1 μl 0.5mol/l EDTA以终止反应，加入3 μl 10 mg/ml tRNA和100 μl TE 缓冲液。
7. 用层析法将未掺入的放射性前体dATP从标记DNA中去除。 |
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