使用台式高分辨质谱分析非变性状态mAb（二）
从图3中可以看出，当使用最低一档分辨率（8750）时，单克隆抗体的不同糖型之间无法得到分离，通过解卷积结果也可以发现，其结果与标准分子量有较大差距。这证明当分辨率不够高时，由于测量精确度不够，造成解卷积结果与标准分子量差距较大。
图2 在不同分辨率下测定单抗分子量测试标准品分子量
图3 8750分辨率下单抗标准品分子量测定结果
图4 35000分辨率下单抗分子量测试标准品分子量测定结果
图4为35000分辨率下对单抗标准品分子量测定的原始谱图和解卷积谱图。从原始谱图中可以看出，单克隆抗体的不同糖型得到了完全基线分离，谱图干净、信噪比高。观察解卷积后的谱图可以发现，当测量精确度提高时，样品的质量精度得到了飞跃性的提高。
图5展示了在140000分辨率下对单抗标准品分子量测定的结果。从图中可以看出，当采用最高分辨率——140000进行分析时，许多在低分辨率下无法得到的峰都得到了解析。在保持高分辨率的同时，Exactive Plus EMR仍具有极高的灵敏度和质量精度，对于150kDa的完整单克隆抗体，主要糖型的质量偏差均在1.5Da之内（外标校正）。
图5 140000分辨率下单抗分子量测试标准品分子量测定结果
4小结
在本实验中，我们使用Exactive Plus EMR高分辨质谱对非变性状态下的单克隆抗体进行了分子量测定。结果表明，Orbitrap系统可以实现单抗不同糖型之间的基线分离，在保持高灵敏度、高质量精度的同时获得杂质与样品峰清晰基线分离、高信噪比的谱图。
从实验结果中还可观察到，基于Orbitrap技术的Exactive Plus EMR高分辨质谱提供了多档分辨率供选择，当分辨率过低不足以将不同修饰的质谱峰分开时，可通过提高分辨率将其分开，从而获得高精度、高可信度的结果。
基于Exactive Plus EMR的非变性质谱技术不仅可以用于单克隆抗体分子量测定，还可用于非变性状态下ADC药物的药-抗体比率（DAR）测定、抗原-抗体结合比测定及蛋白复合物分析等，具有广阔的应用前景。
参考文献
1 Heck, A. J. Nat. Methods 2008, 5, 927-933.
2 Beck, A. et al., TrAC2013, 48, 81-95.
3 Beck, A. et al., Anal. Chem. 2013, 85, 715-36.
