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ELISpot实验操作流程

2020.6.16

ELISPOT全名为酶联免疫斑点检测,英文:Enzyme-linked Immunospot Assay。它结合了细胞培养技术与酶联免疫吸附技术(即ELISA技术),能够在单细胞水平检测细胞因子的分泌情况。其技术原理,一句话概括就是:用抗体捕获培养中的细胞分泌的细胞因子,并以酶联斑点显色的方式将其表现出来。


将细胞因子特异性单克隆抗体包被于乙醇处理过的PVDF膜板上。具体板子处理和包被方法请参考:
https://www.mabtech.com/knowledge-center/tutorials-and-guidelines/plate-coating-guide

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将细胞加入到酶标孔中,不同组加不同的刺激剂或者不加刺激剂。 具体细胞处理方法请参考:
https://www.mabtech.com/knowledge-center/tutorials-and-guidelines/cell-handling


细胞分泌的细胞因子与包被抗体结合。

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将多余细胞除去并洗板后,将生物素标记的检测抗体加入到酶标孔中。


加入连霉亲和素标记的酶偶联物


加入底物
https://www.mabtech.com/knowledge-center/tutorials-and-guidelines/enzymes-substrates/enzyme-conjugates

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使用酶联免疫斑点读板仪读取斑点并分析。



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