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银染实验的操作流程

2022.11.16

实验目的

检测聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质。

实验原理

在碱性条件下,用甲醛将蛋白带上的硝酸银(银离子)还原成金属银,以使银颗粒沉积在蛋白带上。染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关,不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。银染的详细机制还不是非常清楚。

试剂:乙醇、冰醋酸(纯乙酸)、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或 EDTA. Na2.2H2O、甲醛

实验操作程序

固定:30min或者更长时间 100ml 乙醇 40% 乙醇

25ml冰醋酸 10% 冰醋酸

加水到250ml

致敏:30min 75ml乙醇 30%乙醇

17g乙酸钠 28.2g三水乙酸钠

0.5g硫代硫酸钠(大苏打)

加水到终体积250ml

水洗:3 x 10min

银染:20min 0.625g AgNO3

100ul 37%甲醛(在使用前加入)

加水到终体积250ml

水洗:2 x 1 min (注意把握时间,水洗时间长显色速度慢,点的颜色偏黄色)

显色:视情况而定 6.25 g Na2CO3

50ul 37%甲醛(在使用前加入)

加水到终体积250ml

终止:10min 3.65g EDTA. Na2.2H2O或者1g甘氨酸

加水到终体积250ml

保存:1%冰醋酸,4 ℃



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