连接酶链反应的基本原理介绍
连接酶链反应(Ligase chain reaction，LCR)，是在连接酶扩增反应或连接酶检测反应的基础上，引入热稳定的连接酶而建立的类似PCR 技术的新方法。LCR 既可扩增，又可鉴定D N A 异常，与PCR 技术一样可用于已知病因的遗传病大面积普查。
LCR ，即在D N A 连接酶的作用下，通过连接与模板D N A互补的两个相邻寡核苷酸链，快速进行D N A 片段扩增。D N A连接酶可将与模板D N A 链互补的两条毗邻寡核苷酸片段连接起来，两条寡核苷酸链接头处存在碱基错配则阻止连接反应的发生。所以通过连接酶反应，可明确区分寡聚核苷酸是否与模板D N A 完全互补，检测基因点突变。耐热D N A 连接酶在不同温度组成的循环中活性保持不变。这样，在适当的缓冲体系中加入模板D N A 。一套寡聚核苷酸片段，耐热D N A 连接酶，将上述反应体系加热，使模板D N A 在高温下（94 ℃）一分钟变性，解链；然后将反应体系降至退火温度（65 ℃），4 分钟使模板寡聚核苷酸互补成双链；D N A 连接酶催化两相邻的寡核苷酸连接起来。如此循环改变温度，连接反应重复进行，使目的D N A 得到扩增。如果两寡核苷酸接头处存在错配碱基，则没有扩增产物的产生，扩增产物可通过聚丙烯酰胺电泳加以鉴定。
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