PCR技术
| 实验方法原理 |
PCR是在模板DNA、引物和dNTPs的存在下依赖于DNA聚合酶的酶促反应。PCR技术的特异性取决于引物和模板结合的特异性。反应分为变性、退火、延伸三步，经过一定的循环，介于两个引物之间的特异DNA片段得到大量扩增。 |
|---|---|
| 实验材料 | 转基因水稻叶片 DNA 引物 |
| 试剂、试剂盒 | 矿物油 MgCl2 Primer dNTP 水 溴酚蓝 琼脂糖凝胶 EB |
| 仪器、耗材 | 离心机 电泳仪 紫外检测仪 |
| 实验步骤 |
1. 调整模板浓度至10 ng/ml 展开 |
| 注意事项 |
1. PCR只需几个DNA分子作模板就可大量扩增，应注意防止反应体系被痕量DNA模板污染和交叉污染，这是造成假阳性最大的可能。 2. DNA处理最好用硅烷化塑料管以防粘附在管壁上，所有缓冲液吸头、离心管等用前必须高压处理，常规消耗用品用后作一次性处理，避免反复使用造成污染。 3. PCR在超净台内进行，操作前后紫外灯消毒。超净台内设内供PCR用微量离心机、一次性手套、整套移液器和其它必须品；移液品用一次性吸头和活塞的正向排液器，防止移液器基部污染。 4. PCR操作应戴手套并勤于更换。 5. 成套试剂，小量分装，专一保存，防止它用。配制试剂用新器具，用后作一次性处理。 6. 试剂管用前先瞬时离心（10s），使液体沉于管底，减少污染手套与加样器机会。 7. 最后加模板DNA（包括在石蜡油后），马上盖好，混匀，瞬时离心（10s），使水相与有机相分开。加入模板且忌喷雾污染，所有非即用管都应盖严。加模板DNA后应更换手套。 8. 实验设阳性、阴性对照。
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