细胞破碎和蛋白质溶解实验
实验方法原理
通过固体剪切力破碎组织和细胞，释放蛋白进入溶液。市售的匀浆器主要有四类，刀片式组织破碎匀浆器、内切式组织匀浆器、玻璃匀浆器和用于规模生产的髙压匀浆器。玻璃匀浆器的匀浆头（杵）有玻璃制的，也有特夫隆制的，既可以手动也可以电动。由于匀浆过程中蛋白质被蛋白酶降解的可能性较小，所以匀浆是简便、迅速和风险小的组织破碎方法，是实验室首先考虑的方法之一。
实验材料 组织
试剂、试剂盒 缓冲液
仪器、耗材 匀浆器
实验步骤
1. 用组织剪或芋术刀迅速将清洗的组织分离成适宜的小块，如 1 cm3；
2. 每体积湿重组织通常加 3～5 倍体积预冷的匀浆缓冲液至匀浆容器内；
3. 制备匀浆 ：
3.1 电力驱动的玻璃匀浆器以 500～1500 r／min 的速度，匀浆 3～6 次，每次 5～10 s 。
3.2 手动玻璃匀浆器匀浆 10 ～20 次。
3.3 刀片式组织破碎匀浆器和内切式组织匀浆器以 1000～3000 r／min 的速度，高速匀浆 3 次 ，每次 20～30 s，次间暂停几秒。
注意事项
1. 玻璃匀浆器杵和臼之间的空隙应为 0.35～0.70 mm。 电动玻璃匀浆器常用于匀桨肝、心、肌肉等软组织的匀浆；手动玻璃匀浆器常用于培养细胞和脑组织等的匀浆。
2. 匀浆过程应注意维持低温。玻璃匀浆器可外置冰水浴，其他匀浆容器可预冷或在冷室内匀浆。
3. 匀浆时所霈匀浆缓冲液的体积在不同条件下可有很大差别，有时甚至可为湿重组织体积的 9～10 倍。
4. 匀浆的效果可以用相差显微镜观察组织细胞状况评估，也可定量单位湿重组织释放的蛋白质含量监控。
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