降钙素的测定方法及其临床意义
60年代初期降钙素(calci2ton in,CT) 就已被发现，受体分布研究表明其受体主要存在于骨、肾、脑、外周血淋巴细胞及某些肿瘤（肺癌、乳腺癌等)组织中，还有一定量的CT受体存在于肝、肺等组织，从而提示CT为一多功能激素。准确测定生理条件和疾病状况下CT水平的变化，有助于深入认识CT的生物学作用，同时也有助于对临床某些疾病(尤其是甲状腺髓样癌，简称M TC)的早期诊断及其疗效和预后的观察。
一、CT测定方法
样品的处理：产CT肿瘤(如M TC)及其它一些疾病患者,甚至正常人血液、体液和组织提取液中常存在多种形式的免疫反应性CT(IR -CT)。凝胶层析分析表明,M TC病人血液中存在3～5种不同形式的IR-CT,分子量范围为3 500～60 000,小分子物质峰为CT活性形式(即CT单体),占总IR-CT的15%。
目前临床应用较多的主要有以下三种,而以后两种更为常用。
1. 生物分析法:通过对比观察样品与已标定的CT国际标准品的降血钙效应而间接测定CT水平〔6〕。该法灵敏度较低,最高灵敏度为200～300pg m l。现主要用于:①放射性同位素标记CT生物活性的鉴定,这种鉴定是进行CT受体放射配基结合分析的必要前提。②CT提纯时纯度的鉴定。③通过观察CT对临床病人血钙降低效应的强弱,有助于在用CT治疗骨质疏松症等疾病时病人的选择。对CT不敏感者,CT治疗时易出现“逸脱”现象,即开始治疗有效,而治疗一段时间不再有效。
2. 放射免疫分析法(R IA):基本原理主要是利用标准品或待测样品CT与125 I标记CT竞争性地与CT抗体结合,最终结合部分放射性与标准品或待测样品CT浓度呈负相关。根据R IA测定时样品是否提取,将CT的R IA分为提取R IA(ex t ract ion R IA)和直接R IA(direct R IA)。提取R IA的灵敏度和特异性均显著高于直接R IA,前者灵敏度为015～1pg /m l,后者最高灵敏度为20～25p g/ m l。
3. 夹心放射免疫分析(IRM A):该法主要借助于两种单克隆抗体(mA b)和特殊固相分离方法。最早由M otte等1988年建立,首先将mA bCT07(识别抗原位点CT11217)包被聚丙乙烯珠上,加入标准品或样品CT,最后加入125I标记mA bCT08(识别抗原位点CT 26232)。根据结合部分放射性与标准品或待测样品CT浓度呈正相关,即可测定样品CT浓度。CT夹心IRM A的主要优点有:①夹心IRMA直接测定法,灵敏度和特异性均显著高于直接法R IA,IRMA灵敏度为10pg /m l。②完成反应时间短,最快仅需15分钟。③稳定性强:不易受外界环境(如温度)或试验操作所影响(除外样品或标准品加样误差)。
