高效液相色谱柱的选择
在高效液相色谱中，对色谱填料的要求十分严格，色谱填料的选择将关系到分离效果的好坏，所以我们的难题就是，该如何选择色谱填料呢？对此，杭州格图科技教您如何选择高效液相色谱柱。
首先，要选择合适的色谱填料，就必须对此有一定的认识和了解，因为色谱填料的选择范围太宽了，分别为聚合物填料、硅胶基质填料和其它无机填料。
一、聚合物填料，聚合物填料多为聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等，其优点是在PH值为1—14均可使用。这类填料具有较强的疏水性，而且大孔的聚合物对蛋白质等样品的分离非常有效。其缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效较低。
二、硅胶基质填料
1、正相色谱，正相色谱用的固定相通常为硅胶以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基或其他极性 基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已 烷，氯仿，二氯甲烷等。
2、反向色谱，反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙 腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填料有：C18（ODS）、 C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。
三、其它无机填料，其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化由于其特殊的性质，一般仅限于特殊的用途。
上面教了大家如何选择色谱填料，其实光选好色谱填料是不够的，我们还要选择填料粒度，下面就教大家如何选择填料粒度。
如何选择填料粒度？目前，高效液相色谱柱厂家色谱填料粒度从1um到超过30um均有销售，而目前分析分离主要用3和5um填料进行。填料的粒度主要影响 填充柱的两个参数，即柱效和背压。粒度越小，柱压越大，柱压的增加限制了粒度小于3um的填料应用。在相同选择性条件下，提高柱效可提高分离度，但不是唯 一的因素。如果固定相选择是正确，但是分离度不够，那么选用更小的粒度的填料是很有用的。3um填料填充柱的柱效比相同条件下的5um填料的柱效提高近 30%；然而，3um的色谱柱的背压却是5um的2倍。与此同时，柱效提高意味着在相同条件下可以选用更短的色谱柱，即相同的塔板数或分离能力，但是柱长 更短，以缩短分析时间。另外，可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使用温度，比如用乙腈代替甲醇，以降低色谱柱的压力。
对于如何选择高效液相色谱柱这个问题，一定要多了解色谱填料，只有了解它了，在高效液相色谱中，我们就能取得好的分离效果。
二、液相色谱柱的使用
色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。 1、样品的前处理
a、最好使用流动相溶解样品。
b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。 c、使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。 2、流动相的配制
液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：
a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长期留在柱中)。 b、流动相与样品不产生化学反应
c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；降低柱压降，延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
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