诊断感染结核杆菌的新方法 T-SPOT.TB
T-SPOT.TB是以EL ISPOT 技术检测结核感染的新方法, ELISPOT 技术是近20年发展起来的检测抗原特异性T细胞的技术, 是目前最敏感的检测抗原特异性T细胞的方法之一。
结核分枝杆菌为胞内寄生菌，体内结核感染后会长期存在抗原特异性的记忆性T 细胞, 当再次遇到抗原刺激时, 能迅速活化增殖, 释放γ干扰素。基于此原理，英国学者Lalvani 建立了以RD1 编码的结核特异性抗原6 kD早期分泌靶向抗原(early secreting antigen target-6, ESAT-6) 和10 kD培养滤过蛋白(culture filtrate protein-10, CFP-10)为刺激源, 检测外周血中结核特异性释放γ干扰素的T淋巴细胞。其可以检测出1/100000-1/50000外周血单个核细胞(PBMCs)中经某种抗原刺激后释放某种细胞因子的细胞，再 经过酶联显色后, 通过ELISPOT分析系统对斑点进行计数,1个斑点代表1个细胞, 从而计算出抗原特异性细胞的频率。 从而辅助诊断是否存在结核分枝杆菌感染的新方法。T-SPOT.TB 2004年在欧洲、2005年在加拿大被批准使用, 2008年被美国FDA批准应用于临床诊断。
T-SPOT.TB的实验结果清晰, 易于判断。如下图，实验设有空白对照、阳性对照以及以ESAT-6 和CFP-10肽段库作为刺激原的两个实验孔。空白对照孔内斑点数小于10且阳性对照孔内斑点数大于20时视为实验有效。T-SPOT.TB的实验结果用每106PBMCs中斑点形成细胞(spot forming cells, SFC s)的数目来描述, 即SFCs/106PBMCs。
对比常规项目
涂片抗酸染色
快速、低成本
具特异性 (种)，但敏感性不强， 没有鉴定出分枝杆菌的属或种；
痰涂片敏感性低：10,000个菌/ml，检查100个视野可找到1个菌；
痰涂片不能区分MTB和NTM；
MTB培养速度缓慢：增代时间为18－20小时，从1CFU到肉眼可见的菌落需3－5周
阳性结果：分枝杆菌出现传染
阴性结果：不排除分枝杆菌的出现
分子诊断技术
① 对于肺外结核诊断分子生物学技术的有较大的局限性
② 大部分技术需要在菌阳标本或用菌株作为样本，对菌阴标本无法检测
需要专门的仪器，目前普及率不高
尚无针对结核菌潜伏感染的诊断技术
血清抗体检测
由于MTB的抗原性较弱，且与其它分支杆菌具有较强的交叉免疫，其血清抗体检测的灵敏度和特异性均较低， 不适合临床应用。
结核菌素实验原理为通过皮试检测机体对MTB的T细胞免疫反应，所用抗原主要为结核菌提取物（ PPD）；
① 特异性低：与卡介苗和环境中的分支杆菌会产生交叉反应
② 敏感性低：在活动性结核中只有75%-90%；
③ 影响因素较多：年龄、卡介苗接种、免疫力、环境分支杆菌、药物、操作人员等。
T-SPOT.TB 特点
『优点』
① 特异性好，与绝大多数环境分枝杆菌和卡介苗无交叉反应，其特异性为93%-100%。
② 灵敏度高，在免疫力低下/受抑制人群中有很高的检出率；其敏感性为90%-95%。
③ 快速，24-48小时可报告结果，是目前诊断结核病最有价值指标之一。
『弊端』
① 对标本要求高，不能冷冻或冷藏，血液样本需要短时间内进行送检和检测。
②结果需要结合临床和其它检测进行判断，阴性结果不能排除暴露或感染结核杆菌的可能性。
③不能确定病变部位。
由此可见结核感染的常规检测诊断方法存在着阳性检出率偏低，假阳性率与假阴性率较高，会影响临床诊治的需要，而结核感染T细胞检测（T-SPOT.TB）具有高灵敏度、高特异性而且快速的检测的特点。 在鉴别活动性结核和潜伏性结核感染、预测结核发病风险方面也具有一定意义,而且被越来越多的国家认可并应用于临床诊断。
临床意义
本项检测辅助临床诊断结核感染，可用于结核病的快速诊断，应用于控制活动性结核的发生与再发生、潜伏性结核感染的预防、儿童结核病的辅助诊断，可为临床诊断肺结核和肺外结核提供重要依据。
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