柔嫩艾美耳球虫子孢子的DE-52纯化方法
实验概要
球虫子孢子广泛应用于球虫的体外研究和球虫的攻毒实验等实验中，它的纯化收集的效率直接影响着实验的进程。DE-52是一个被广泛应用的纤维柱纯化体系，其纯化效率高，子孢子获得量较大。
实验步骤
1. DE-52维素层析柱的制备
1) 称取DE-52纤维素2.0g，用去离子水浸泡24小时，使其溶胀，每隔6-8小时倒掉上清，用去离子水换液一次；
2) 弃掉上清，用适量0.1mol/L NaOH溶液浸泡，混匀静置60min后，倒掉上清；
3) 弃掉NaOH溶液，加上适量的去离子水，混匀静置60min；
4) 弃掉上清，加上适量的0.1mol/L HCl溶液，混匀静置60min；
5) 弃掉HCl溶液，加上适量的去离子水，混匀静置60min；
6) 弃掉上清，加上洗脱液混匀，装入直径1.0cm，高约20cm的层析柱中至柱高4-5cm；
7) 用洗脱液平衡DE-52至PH值为8.0，待用。
2. 柔嫩艾美耳球虫子孢子的纯化
1) 取4℃冰箱保存的约4×107个新鲜艾美耳球虫卵囊，离心(3000r/min)10min，弃去上清，再用PBS重悬沉淀，重复洗涤2次，除去重铬酸钾；
2) 用PBS重悬卵囊沉淀，于研磨器冰水中研磨，取样镜检，直到90％的卵囊壁破裂，释出孢子囊时停止研磨；
3) 研磨器中的孢子囊液移至EP管中，3500rpm离心6min，弃上清，加入PBS洗涤2次，直到上清成透明液体；
4) 按照每2百万卵囊加入1ml消化液(41℃水浴预热)的比例，加入消化液，重悬沉淀，放于41℃水浴中消化，每隔10min左右摇晃一次消化液，消化40min左右后，每隔5min取样镜检观察，直到90%的子孢子释放；
5) 子孢子悬液3500rpm，离心6min，加入PBS洗涤2次，用41℃预热的洗脱液悬浮，准备过柱抽提；
6) 将DE-52进行重新装柱；
7) 待洗脱液流至DE-52上约3cm时，关闭恒流泵，然后向洗脱液中缓缓加入子孢子悬液；
8) 加入完子孢子的粗提液后，打开恒流泵并开始在离心管中收集子孢子；
9) 3500rpm离心l0min，收集子孢子；
10) 在收集的子孢子沉淀中加入适量的灭菌PBS，3500rpm离心l0min，洗涤2次，收集子孢子沉淀。
