球虫子孢子DE-52纯化的注意事项
实验概要
DE-52是一个被广泛应用的球虫子孢子纤维柱纯化体系，其纯化效率高，子孢子获得量较大。本文对纯化过程中的注意事项进行了一些总结和阐述。
实验步骤
1. 10％子孢子消化液(pH7.6)：
新鲜鸡胆汁 10ml
胰酶 0.75g
将上述物质融于90mlPBS(pH7.6)中，过滤后，分装-20℃保存。
2. 洗脱液（PH 8.0）：
甘氨酸 glycine 1.5g
食盐 15.8g
用800ml蒸馏水溶解上述的溶质后，用NaOH(0.5mol/L)调节溶液的pH值至8.0左右。加水至1L。高压蒸汽灭菌35min，保存于室温。
3. 0.1mol/L NaOH溶液（500ml）：
NaOH 2.0g
把NaOH溶解于200ml水中，定容至500ml，即可。
4. 0.1mol/L HCl溶液（200ml）：
浓盐酸 1.72ml
把浓盐酸轻轻加入150ml超纯水中，定容至200ml，即可。
注意事项：
5. 千万不要破坏DE-52纤维素的界面；
6. 重新装柱的原因：由于用洗脱液较长时间的洗脱使DE-52已经被压实，不利于后续子孢子的洗脱，所以在子孢子粗提液上样之前，要对DE-52重新装柱，但重新装柱的量最好是一个柱的体积量；
7. 子孢子随溶液洗脱时，受温度的影响很大。夏季做实验时，直接室温洗脱收集子孢子即可：但冬季实验时，最好在柱子旁边放上灯泡，维持洗脱柱的周围温度在41℃左右，否则，子孢子的收集数量很有限；
8. 试验发现已经配制好的甘氮酸(pH8.0)灭菌后，低温放置时其pH值会降低至pH7.6-pH7.8，所以建议冬季做试验时，配制好的甘氨酸在灭菌以前，将其pH值调至8.4左右。
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