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艾滋病常见的几种筛查试验的探讨

2021.7.21

实验室检测是作为是否感染艾滋病的最重要的依据,所以艾滋病的检测,在疾病的判断治疗中,显得尤为重要,而艾滋病的检测方法,分为很多种,下面就各种艾滋病筛查的检测方法适用范围及特点,和大家一起探讨一下。

一、检测的样本

HIV感染的常用检测标志物为:抗体HIV-1/2,抗原P24以及HIV的RNA。艾滋病检测最常用的样品有血液,包括血清、血浆和全血以及滤纸干血斑,唾液或尿液有时也可作为测试样品。

不同的标志物,在体内产生的时间不同,所以要选用合适的标志物,以便准确确定感染的情况。
 

艾滋病常见的几种筛查试验的探讨  


二、检测方法

艾滋病的检测分为筛查试验和补充试验。

筛查试验包括酶联免疫吸附试验(ELISA),化学发光或免疫荧光试验(CIA/IFA),快速检测(RT)及其它试验,

补充试验包括确诊试验及核酸试验,在2015年《全国艾滋病检测技术规范》中,将核酸试验也纳入到后期的补充试验中,以对筛查阳性的样品进行进一步的检测,其中确证试验主要包括免疫印迹试验(WB),条带/线性免疫试验(RIBA/LIA)。核酸试验包括核酸定性和核酸定量试验。

1、酶联免疫试验(ELISA)

ELISA有几种类型,主要为双抗原夹心法测抗体,双抗体夹心法测抗原,间接法测抗体,竞争法、捕获包被法。

试验可使用血液(包含血清、血浆和滤纸干血斑)、尿液样品,多为HIV抗体检测试剂,HIV抗原抗体联合检测试剂可同时检测血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗体,HIV抗原/抗体包被于固相载体,加入待检样品和酶标记的HIV抗原/抗体,加底物显色,用酶标仪测定结果。
 


艾滋病常见的几种筛查试验的探讨  


2、化学发光或免疫荧光试验(CIA/IFA)

试验采用发光或荧光底物,可使用血液(包含血清和血浆)、尿液样品,既可

检测抗体,也可联合检测抗原抗体。HIV抗原/抗体包被于固相载体,加入待检样品和酶或荧光标记的HIV抗原/抗体,加发光或荧光底物,用发光或荧光仪测定结果。

3、快速检测(RT)

快速检测作为一种方便的方法,现在越来越多的应用于实际工作及个人的自测中,这种试验操作简便快速,适用于应急检测、门诊、急诊检测、VCT及检测点等,有着不可替代的优势。常用的类型为明胶颗粒凝集试验(PA),免疫渗滤试验(胶体金或胶体硒),免疫层析试验,。

明胶颗粒凝集试验(PA):将重组HIV-1抗原(HIV-1/gp41和HIV-1/P24)和HIV-2抗原(HIV-2/gp36)包被在人工载体明胶粒子上,这些致敏粒子和血中的HIV-1抗体或HIV-2抗体发生凝集反应,由此可以检测出血清和血浆中的HIV-1/2的抗体。

免疫渗滤试验:斑点免疫胶体金(或胶体硒)快速试验:均以硝酸纤维膜为载体,HIV抗原点状或线状固定在膜上,加待检样品,利用微孔滤膜的可滤过性,使抗原抗体反应。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点或条带,有效试验的质控点必须显色,反应时间在10分钟以内。

免疫层析试验:以硝酸纤维膜为载体,HIV抗原线状固定在膜上,待检样品沿着固相载体迁移,阳性结果在膜上抗原部位显示出有色条带,有效试验的质控带必须显色,反应时间在30分钟以内。
 



艾滋病常见的几种筛查试验的探讨  

三、检测试剂

在试验中,经常说到的是检测试剂为三代或四代之类的,这个艾滋病检测的试剂已经从第一代发展到第四代,目前基本上大都是使用三、四代的试剂,下面以ELISA试剂为例做个具体的说明。

第一代HIV诊断试剂原理为间接ELISA法,所用的包被抗原为体外培养的HIV裂解物,含有很多杂抗原,主要的HIV结构和表达的蛋白浓度不能保证,灵敏度和特异性都不高,会出现很多的假阴性和假阳性。

第二代使用的是基因重组和合成多肽抗原,利用间接ELISA原理,窗口期比第一代缩短20天,灵敏度和特异性有所提高,可以同时检测HIV-1/2抗体。

第三代利用双抗原夹心法检测标本中的抗体,酶标记物改为特异性HIV抗原,检测HIV-1/2抗体。

第四代试剂是一种HIV-1/2抗体及P24抗原的联合检测方法。
 


ELISA试剂  

检测物  

抗原来源  

检测原理  

窗口期(天)  

第一代  

IgG抗体  

病毒裂解产物  

间接法  

35~45  

第二代  

IgG抗体  

基因重组抗原  

合成肽  

间接法  

25~35  

第三代  

igM/igG抗体  

基因重组抗原  

合成肽  

双抗原夹心法  

20~30  

第四代  

P24抗原,igM/igG抗体  

基因重组抗原  

合成肽  

P24抗原的单克隆抗体  

双抗原夹心法  

双抗体夹心法  

15~20  


四、筛查报告及流程

HIV抗体筛查试验报告使用格式化的HIV抗体筛查检测报告。筛查试验无反应报告为“HIV抗体阴性”;有反应必须进行复检,复检两次检测均无反应报告为“HIV抗体阴性”,复检检测均有反应或一个有反应一个无反应需进行“补充试验”;报告为“HIV感染待确定”,不能出具阳性报告。

艾滋病常见的几种筛查试验的探讨  






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