丙酮酸脱羧酶的测定实验
实验方法原理
在酶测定中二氧化碳的释放可以用压力计或 14C1-丙酮酸盐测定。在此将描述一个与ADH 有关的实验。
实验材料 酶样品
试剂、试剂盒 柠檬酸缓冲液丙酮酸焦磷酸硫胺素MgCl2NADHADH
仪器、耗材 分光光度计
实验步骤
实验所需「试剂」具体见「其他」
0.98 ml 实验混合物
0.02 ml 酶样品
记录 340 nm、25℃ 处吸光值的减少，ε340＝6.3×103 l/（mol·cm）。
注意事项
其他
试剂：
0.2 mol/L 柠檬酸缓冲液，pH 6.0
1 mol/L 丙酮酸（丙酮酸钠，Mr＝110.0；1.1 g 溶于 10 ml H2O）
0.01 mol/L 焦磷酸硫胺素（ThDP，脱竣辅酶，Mr＝460.8；46.1 mg 溶于 10 ml H2O）
0.1 mol/L MgCl2（MgCl2·6H2O，Mr＝203.3；203 mg 溶于 10 ml H2O）
0.01 mol/L NADH（二钠盐，Mr＝709.4；71 mg 溶于 10 ml H2O）
ADH 来自酵母（20 mg/ml）
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