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固体培养基上细菌培养实验_辅助法

2019.4.09
实验方法原理大肠杆菌的许多菌株在穿刺瓶中可以保存数年,在-70 °C则可以无限期保存。
试剂、试剂盒

琼脂DMSO

仪器、耗材

试管平板

实验步骤

一、穿刺保存


1.  在一个耐高压的带有橡皮塞或Teflon盖的气密性小瓶中加人2/3体积穿刺培养基。


2.  挑取一个单菌落,反复将接种环深刺人琼脂中。


3.  拧松盖子,于37 °C培养(8~12 h )直到在穿刺孔迹中的细菌生长至可见的雾状。


4.  拧紧盖子于15~22 °C存放于暗处。


5.  按以下方法复苏菌株

用一支无菌接种环挑取一些带有细菌的琼脂,然后涂布于LB
平板上并划线以得到单菌落。


二、冷冻保存


1.  将2 ml对数生长中期培养液或1 ml新鲜饱和的培养液加人到一穿刺小瓶或Nunc小瓶中,这些小瓶中已装有1 ml甘油溶液或含7%二甲基亚砜(DMSO)。

最好使用反应级别或分光光度学级别的DMSO作为冻存液,因为这样的试剂在存储时通常盖得很严实。


2.  保存于 -20°C或 -70°C。

 

于-70°C保存时,大多数菌株可保持更长的存活时间。


3.  复苏时,用一无菌牙签或吸管刮取固体冰碴片,然后在LB平板上划线。仔细操作不要让其融化。

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