柔嫩艾美耳球虫卵囊的传代和收集
实验概要
目前鸡球虫不能在离体的情况下长期保持其毒性和活力，每隔一段时间需要以鸡作为实验动物进行球虫的传代、分离、收集和保存。此方法为柔嫩艾美耳球虫的日常传代和收集方法。
实验步骤
1. 将保存在2.5%重铬酸钾中的柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊悬液离心10min(3000r/min)，弃去上清，再用PBS重悬沉淀，重复洗涤2次，除去重铬酸钾；
2. 经口接种给饲养于无球虫环境下7日龄的小鸡，攻虫数量为孢子化卵囊5×104个/只，感染后第8天扑杀所有攻毒的鸡只，解剖收取盲肠；
3. 收集的盲肠经过匀浆机匀浆，加入清水3000rpm离心15min，弃上清，用适当PBS重悬；
4. 加入胃蛋白酶(2毫克/毫升)，调整PH为2.0，39℃处理1小时，过200目筛子；
5. 收集液体，3000rpm离心10分钟，弃去上清，沉淀用饱和食盐水漂浮，3000rpm离心15min，收集上清；
6. 上清中加入至少三倍体积清水，降低盐水浓度，再次3000rpm离心15min，弃上清；
7. 加入有效氯含量7%-10%的NaClO冰浴消化5min左右，加入3倍左右体积的清水稀释，3000rpm离心15min，收集沉淀；
8. 沉淀用2.5%重铬酸钾溶液吹打均匀，29℃通风孢子化，待孢子化率达到90%，将此卵囊收起贴上标签，4℃储存(最好储存少于半年)。
推荐
-
会议会展
