如何确定一抗的稀释比例?
如果说明书中有推荐的稀释比例，请按照该稀释比例进行实验。但是由于标本类型、实验条件、操作环境等各种因素的影响，推荐浓度仅作为参考。实验者需要在推荐浓度周围进行多个浓度梯度的实验，从中发现最佳的稀释比例。
如果说明书没有推荐稀释比例，仅注明“Use at an assay dependent dilution”，就需要做大量的预实验来摸索最佳的比例了。下表列出的纯化抗体抗体用于不同实验方法时常用的工作浓度，可以作为预实验的参考。未纯化的抗体一般在说明书中不会标明抗体的浓度，因为大部分全抗血清、培养上清或腹水形式的产品浓度都是没有经过测定的。如果未纯化抗体产品的说明书中没有标明其中特异性抗体的浓度，实验者可以参考下表中“估计浓度”确定各种实验稀释比例。
请记住，下表中的各种稀释比例和工作浓度仅仅是作为一个起始点，需要根据试验结果来进行适当的调整。最好以此起点作一系列的浓度，从中确定最佳的工作浓度和稀释比例！
组织培养上清 | 腹水 | 全抗血清 | 纯化抗体 | |
WB / dot blot | 1/100 | 1/1000 | 1/500 | 1 ug/ml |
IHC / ICC | neat - 1/10 | 1/100 | 1/50 - 1/100 | 5 ug/ml |
EIA / ELISA | 1/1000 | 1/10000 | 1/5000 | 0.1 ug/ml |
FC | 1/100 | 1/1000 | 1/500 | 1 ug/ml |
IP | 1/100 | 1/50-1/100 | 1 - 10 ug/ml | |
Concentration estimate | 1 - 3 mg/ml | 5 - 10 mg/ml | 1 - 10 mg/ml |
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